2022年度兽医微生物实验指导 .pdf

兽医微生物实验教案

实验一显微镜油浸系使用及细菌基本形

态构造观测

【目规定】

1.掌握对的使用及护理显微镜办法,特别是油浸系使用及护理。

2.对的结识细菌基本形态和构造。

【油浸系原理】

油浸系是在油浸镜与标本之间加1滴香柏油,调节光源检查细菌标本办法。油

浸镜是一种高倍放大物镜,普通都刻有放大倍数,如95×、100×等。其镜头标记

国产镜多用“油”字表达,国外产品则用“Oil”(OilImmersion)或HI(homogenmus

Immersion)表达。并且油镜镜身较高倍镜和低倍镜为长,镜片最小,这也是辨认另

一种标志。其使用原理是由于香柏油与玻璃折光率相似(香柏油为1.515,玻璃为

1.52)。镜检时,滴加香柏油作用是使光源尽量多进入物镜中,避免光线通过折光

率低空气(折光率为1.O)而散失,因而能提高物镜辨别率,使物像明亮清晰。

【器材及试剂】

1.菌种:大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌、细菌三型等标本片;

2.仪器:普通光学显微镜;

3.材料:香柏油,二甲苯,擦镜纸等。

【操作环节】

(一)细菌基本形态构造观测

1.准备安顿显微镜调节光源调节双筒目镜间距调节聚光器数值孔

径值。

将光圈完全开放,升高聚光镜与载物台同高,置标本片于载物台上,在低倍镜

下对光,用于转动反光镜以调节之,至视野最亮时为止。若用天然光源宜用反光镜

平面,较弱光源用凹面。检查未染色标本,光不适当太强,染色标本需强光。光线

强弱可通过放大或缩小光圈、升降聚光镜、旋转反光镜调节之。

2.观测将香柏油一滴滴于标本片有颜色观测区,并置于载物台上,用片夹

固定好,用推动器将观测区置于物镜正下方,依次用高倍镜油镜观测。用油浸镜

检查,使油镜头浸入油滴中,几乎与标本面接触为度。然后由接目镜注视镜内,同

步慢慢转动粗调节螺旋提起镜筒(绝对不能下降镜筒)至能模糊看到物像时,再转

动细螺旋(细螺旋转动普通不超过1周),直至物像清晰为止。涉及大肠杆菌、葡萄

球菌形态及炭疽芽孢、巴氏杆菌荚膜和大肠杆菌鞭毛等细菌特殊构造。

(二)显微镜养护

1.上升镜筒,取下载玻片。

2.用擦镜纸拭去镜头上镜油,然后用擦镜纸蘸少量二甲苯(香柏油溶于二甲

苯)擦去镜头上残留油迹,最后再用干净擦镜纸擦去残留二甲苯。

切忌用手或其她纸擦拭镜头,以免使镜头沾上污渍或产生划痕,影响观测。

3.用擦镜纸清洁其她物镜及目镜;用绸布清洁显微镜金属部件。

4.将各某些还原,反光镜垂直于镜座,将物镜转成“八”字形,再向下旋。同

步把聚光镜降下,以免接物镜与聚光镜发生碰撞危险。

作业

一．名词解释

细菌荚膜芽孢油浸系

二．问答题

1.绘制葡萄球菌、大肠杆菌、炭疽杆菌荚膜及芽孢等形态及排列方式;

2.使用油镜时应注意哪些问题?加香柏油前载片上可否有水,为什么?

3.细菌有哪些基本形态,各有哪些特性?

实验二细菌抹片制备及染色

【目规定】

(1)掌握细菌抹片制备办法和几种惯用染色办法。

(2)结识革兰氏染色反映特性。

【基本原理】

1.简朴染色法简朴染色法是运用单一染料对细菌进行染色一种办法,普

通用于观测个体形态与细菌排列。由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负

电荷,因此普通采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。

美蓝是美蓝盐酸盐,可解离为带正电荷美蓝,很容易与细菌结合使菌体着色。染

色后细菌细胞与背景形成鲜明对比,在显微镜下更易于辨认。

—

2.革兰氏染色液G菌:细胞壁中具有较多类脂质,肽聚糖层较薄、交联度低,

故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增长了细胞壁通透性,使初染结晶紫和碘复

+

合物易于渗出,成果细菌就被脱色,再经复红复染后就成红色。G菌:细胞壁中肽聚

糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂解决后使肽聚糖层孔径缩小,通透性

减少,故细菌仍保存初染时颜色。

【器材及试剂】