中医药研究常用分子生物学技术.ppt

遗传密码——三联子所谓翻译是指将mRNA链上的核苷酸从一个特定的起始位点开始，按每3个核苷酸代表一个氨基酸的原则，依次合成一条多肽链的过程。这3个核苷酸就是一个密码子。翻译从起始密码子AUG开始，沿mRNA5→3方向连续阅读密码子，直至终止密码子为止，生成一条具有特定序列的多肽链——蛋白质。Crick关于tRNA分子破译mRNA遗传密码三联子的原始构想三联子密码及其破译因为mRNA中只有4种核苷酸，而蛋白质中有20种氨基酸，以一种核苷酸代表一种氨基酸是不可能的。若以两种核苷酸作为一个氨基酸的密码（二联子），它们能代表的氨基酸也只有42=16种。若以3个核苷酸代表一个氨基酸，有43=64种密码子，满足了编码20种氨基酸的需要。用核苷酸的插入或删除实验证明mRNA模板上每三个核苷酸组成一个密码子遗传密码的性质密码的简并性4种核苷酸可组成64个密码子，现在已经知道其中61个是编码氨基酸的密码子，另外3个即UAA、UGA和UAG并不代表任何氨基酸，它们是终止密码子，不能与tRNA的反密码子配对，但能被终止因子或释放因子识别，终止肽链的合成。通用遗传密码及相应的氨基酸C亮氨酸（Leu，L）脯氨酸（Pro，P）组氨酸（His，H）精氨酸（Arg，R）U亮氨酸（Leu，L）脯氨酸（Pro，P）组氨酸（His，H）精氨酸（Arg，R）C亮氨酸（Leu，L）脯氨酸（Pro，P）谷氨酰胺（Gln，Q）精氨酸（Arg，R）A亮氨酸（Leu，L）脯氨酸（Pro，P）谷氨酰胺（Gln，Q）精氨酸（Arg，R）GA异亮氨酸（Ile，I）苏氨酸（Thr，T）天冬酰胺（Asn，N）丝氨酸（Ser，S）U异亮氨酸（Ile，I）苏氨酸（Thr，T）天冬酰胺（Asn，N）丝氨酸（Ser，S）C异亮氨酸（Ile，I）苏氨酸（Thr，T）赖氨酸（Lys，K）精氨酸（Arg，R）A甲硫氨酸（Met，M）苏氨酸（Thr，T）赖氨酸（Lys，K）精氨酸（Arg，R）GG缬氨酸（Val，V）丙氨酸（Ala，A）天冬氨酸（Asn，N）甘氨酸（Gly，G）U缬氨酸（Val，V）丙氨酸（Ala，A）天冬氨酸（Asn，N）甘氨酸（Gly，G）C缬氨酸（Val，V）丙氨酸（Ala，A）谷氨酸（Glu，E）甘氨酸（Gly，G）A缬氨酸（Val，V）丙氨酸（Ala，A）谷氨酸（Glu，E）甘氨酸（Gly，G）G除色氨酸（UGG）只有一个密码子外，其他氨基酸都有一个以上的密码子。9种氨基酸有2个密码子，1种氨基酸有3个密码子，5种氨基酸有4个密码子，3种氨基酸有6个密码子。由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并（degeneracy），对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子（synonymouscodon）。AUG和GUG既是甲硫氨酸及缬氨酸的密码子又是起始密码子。密码子的兼并性密码子与反密码子的相互作用tRNA的反密码子在核糖体内是通过碱基的反向配对与mRNA上的密码子相互作用的。1966年，Crick提出摆动假说（wobblehypothesis），解释了反密码子中某些稀有成分（如I）的配对，以及许多氨基酸有2个以上密码子的问题。mRNA上的密码子与tRNA上的反密码子配对示意图。密码子与tRNA反密码子臂上相应序列配对；当反密码子第一位是I时，密码子第三位可以是A、U或C。1tRNA2tRNA不但为每个三联密码子翻译成氨基酸提供了接合体，还为准确无误地将所需氨基酸运送到核糖体上提供了运送载体，所以，它又被称为第二遗传密码。3不同tRNA在结构上存在大量的共性，由小片段碱基互补配对形成三叶草形分子结构，有4条根据结构或已知功能命名的手臂。4最常见tRNA分子有76个碱基，相对分子质量约为2.5×104，不同的tRNA分子可有74～95个核苷酸不等。D臂中存在多至3个可变核苷酸位点，17：1及20：1、20：2。最常见的D臂缺失这3个核苷酸，而最小的D臂中第17位核苷酸也缺失了。D臂是根据它含有二氢尿嘧啶（dihydrouracil）命名的。受体臂（acceptorarm）由链两端序列配对形成的杆状结构和3‘端未配对的3～4个碱基所组成，其3’端的最后3个碱基序列永远是CCA，最后一个碱基的3’或2’自由羟基（—OH）可以被氨酰化。TψC臂是根据3个核苷酸命名的，其中ψ表示拟尿嘧啶；反密码子臂是根据位于套索中央的三联反密码子命名的；引物的切除：01DNA聚合酶I发挥5′→3′外切酶活性，切去引物RNA并填补空缺（缺刻平移），留下的缺刻由DNA连接酶连上。02DNA复制的终止1DNA复制在复制终止位点处终止。环形DNA分子的终止在单向复制的环形DNA分子中，复制终止也即它的复制起