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以家为家，以乡为乡，以国为国，以天下为天下。——《管子》

糖化血红蛋白几种常见检测方法

2018-8-2115:41

目前临床实验室中应用的糖化血红蛋白检测方法主要有两大类:一

类方法基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白所带的电荷不同,如离子层

析法、电泳等方法;另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点,

如亲和层析、离子捕获法和免疫法等。其中高效液相离子层析法

(HPLC)被公认为金标法。

1.离子层析法离子层析法精密度高、重复性好且操作简单,被临床

广泛采用。检测原理由于血红蛋白β链N末端缬氨酸糖化后所带电荷

不同,在偏酸溶液中总糖化血红蛋白(GHb)及HbA均具有阳离子的

特性,因此经过阳离子交换层析柱时可被偏酸的缓冲液平衡过的树脂来

吸附,但二者吸附率不同,GHb正电荷较少吸附率较低,HbA正电荷较

多吸附率较高。用不同pH的磷酸盐缓冲液可以分次洗脱出GHb和H

bA,用KCN可将Hb转化为高铁氰化血红蛋白,用分光光度计测定。

或者得到相应的Hb层析谱,其横坐标是时间,纵坐标是百分比。

HbA1c值以百分率来表示。现在大部分都用全自动测定仪测定,如日本

TOSOH公司生产的全自动糖化血红蛋白分析仪曾应用于美国糖尿病控

制和并发证试验(DCCT)研究,其离子交换HPLC法是HbA1c检测的

金标准。当前推出的HLC-723G7从开机到报告第一个结果仅需3.6

min,标本无需前处理,操作维护都非常方便,是目前测试GHb精密度、

准确性最高的方法。国内主要采用Bio-Rex70阳离子树脂微柱层析法,

其微柱可重复使用多次,更大型的仪器有SCIENTIFIC公司的Hb-Gold,

除可全自动测定糖化血红蛋白外,还可分离检测血红蛋白的600多种变

异体和亚型,用于地中海贫血等疾病的诊断。但其缺点是价格昂贵,仅

在一些发达国家使用,且容易受到如下干扰:胎儿血红蛋白(HB-F)与

HbA1c的带电性很相近,在离子交换HPLC分析图上可能呈现一个独

立的Hb-F峰,也可能与HbA1c峰重叠(视离子交换柱的分辨能力而

定)。

2.手工微柱法手式微柱操作会受到人工因素影响,可能会洗脱不完

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全或过度洗脱并受外界环境温度的影响,而某些血红蛋白如HbF异常

增加时,也会与糖化血红蛋白同时洗脱,从而使结果产生偏差。目前有

Bio-Rad和西班牙BIOSYSTEMS等多家公司产品,相应的仪器以英

国DREWSCIENTIFIC公司DS5糖化血红蛋白仪为例(Bio-Rad公司

IASTA亦为同一产品),采用微柱法离子交换层析和梯度洗脱技术可全

自动分离血红蛋白的变异体与亚型,除可测定糖化血红蛋白外,还可同

时检测出血红蛋白S(HbS)与血红蛋白C(HbC)的存在与否,在计算

糖化血红蛋白值时会自动扣除变异体产生的影响,从而使结果更为准确,

可靠,变异系数(CV)值2%。同时该仪器