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操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰
血清总蛋白测定(双缩脲试剂
法)
操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级：
组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰
实验名称血清总蛋白测定（双缩脲试剂法）
实验日期2014-11-21实验地点第五实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作；
2、熟悉血清总蛋白的临床意义；
3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。
二、实验原理
（一）：双缩脲反应
在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色
的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲
（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双
缩脲反应，生成紫红色络合物；蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同
样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸
光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法：
实验材料
样品：大牛血清
试剂：双缩脲试剂、蛋白质标准液（70g/L）、生理盐水（0.9%）
器材：试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球
设备：1100分光光度计、水浴锅
操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰
实验步骤
取3支试管，做好标记(B空白对照，S标准液，U为待测大牛血清)，按下表操作：
加入物（ml）B(空白）S（标准）U（待测）
大牛血清（1：10）--0.5
蛋白标准液（1：10）-0.5-
0.9%氯化钠溶液0.5--
双缩脲试剂4.04.04.0
a.各管混匀，观察各试管颜色
b.将各试管置于37℃水浴锅中加热20min，观察颜色
c.将试管中的液体倒入比色杯中，置于1100分光光度计的样品槽内，在波长540nm，
以空白管调零，测S和U管吸的光度。
d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管
依据公式算出结果
四、结果与讨论：
（一）：实验结果
1、实验现象：
a、在实验中首先加入双缩脲试剂，再依次加入0.9%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应
的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化，呈淡蓝色透明状；
操千曲尔后晓
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