实验十七双缩脲法测定血浆总蛋白质含量_2.pdfVIP

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

实验十七双缩脲法测定血浆总蛋白质含量

蛋白质生命的基础，任何生命离不开蛋白质，本实验为了提高同学

们的自主动手能力，培养同学们有序化的操作能力，以便各同学在今

后的工作中有更出色的表现，不仅能够丰富各同学的知识，而且也能

够增强各同学的自信心。

1、实训应用：检测蛋白质的含量，例如:检测食品中蛋白质含量是

否达到标准，检测血清中的蛋白质是否出现异常等等。

2、实训原理

凡含有两个以上肽键的化合物在碱溶液中能与硫酸铜作用生成

紫色或紫红色复合物，这一反应称为双缩脲反应。蛋白质是由许多氨

基酸通过肽键连接起来的，因而可与双缩脲试剂发生颜色反应，且颜

色的深浅与蛋白质浓度成正比。

3．试剂的配制

3.1双缩脲试剂：称取硫酸铜1.5g加水100ml，加热助溶。另

取酒石酸钾钠6.0g，碘化钾5g，溶于500ml水中。两液混匀后，在

搅拌下加10%NaOH溶液300ml，用蒸馏水稀释至1000ml，储存在塑料

瓶中。此液可以长期保存。若储存瓶中有黑色沉淀析出，需重新配置。

3.21%蛋白质标准溶液。

3.3分光光度计。

4、主要器材

本次实训分为六大组，每大组再分成四个小组，以下为本次实

训要器材及数量：试管（150支）500ml烧杯（6个）小烧杯（45

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

个）1000ml容量瓶（6个）10ml量筒（46个）胶头滴管（46

个）玻璃棒（6个）塑料瓶（6个）分光光度计（180个）移

液管或10ml量筒（46个）

5．实验安排

本班生物实验分为六大组，本次实验每大组再分成四个小组，

要求自主配试剂（人员自行安排，该洗的还是要洗一下）。在配好本

实验所需的试剂后，每组再分成两人一组完成本次实验.

注意事项

5.1分光光度计的盖要轻拿轻放，拿器皿时，手必须拿在粗糙面;

器皿外有水时用吸水纸吸干，用擦纸一次擦干（不能来回擦

拭）。

5.2使用时检查光测是否是透视比

5.3使用前必须先打开盖子调0，盖上是出现100，连续两次出

现0与100时，方可使用

6．实训操作：

6.1标准曲线的绘制：取小试管6支，按下表：

表5-1实训的具体操作

123456

1%蛋白质标准液（ml）0.10.30.50.70.9—

0.9%NaCl(ml)0.90.70.50.30.11.0

双缩脲试剂（ml）4.04.04.04.04.04.0

蛋白质浓度（ml）10305070900

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

0

按