T GDSF 0003—2023 罗非鱼无乳链球菌和海豚链球菌双重荧光PCR检测方法.pdfVIP

ICS65.150

CCSB50

GDSF

广东水产学会团体标准

T/GDSF0003—2023

罗非鱼无乳链球菌和海豚链球菌双重荧光

PCR检测方法

DuplexReal-timePCRMethodfortheDetectionofStreptococcusagalactiaeand

StreptococcusiniaeinTilapia

2023-9-4发布2023-9-5实施

广东水产学会发布

目次

前言III

1范围1

2规范性引用文件1

3术语和定义1

4缩略语1

5试剂和耗材1

试剂1

引物和探针1

6仪器设备2

7样品采集与处理2

样品采集2

7.1.1采样工具2

7.1.2待检样本2

7.1.3样品运输2

样品前处理2

7.2.1池塘水样品前处理2

7.2.2环境拭子前处理2

7.2.3细菌培养物2

7.2.4组织样品前处理2

8操作方法2

DNA提取3

反应体系的配制3

加样3

荧光PCR反应3

8.4.1上机3

8.4.2循环条件设置3

8.4.3荧光通道设定3

9结果判定3

阈值设定3

质控标准3

结果描述及判定3

附录A（规范性）溶液配置5

A.10.01mol/LPBS(pH7.2)溶液的配置5

A.2阳性对照5

A.3阴性对照5

附录B（规范性）引物、探针的名称、序列和工作浓度6

B.1引物、探针的名称、序列和工作浓度6

附录C（规范性）DNA提取试剂盒方法7

C.1DNA提取方法7

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由广东水产学会提出并归口。

本文件起草单位：东莞市动物疫病预防控制中心、广东加和检测技术服务有限公司、广东加和生物

技术有限公司、广东海大畜牧兽医研究院有限公司、东莞市石排镇农业技术服务中心。

本文件主要起草人：张险朋、李敏、李小军、吴胜旭、李中圣、胡毅军、袁玲、萧广勇、王伟强、

丁文桂、李永福、伍建敏、王自强、黄育浩、龙海鹰、邓海燕、李本旺。

罗非鱼无乳链球菌和海豚链球菌双重荧光PCR检测方法

1范围

本文件规定了同时检测罗非鱼无乳链球菌和海豚链球菌的双重荧光PCR检测方法。

本文件适用于罗非鱼组织样品、鱼苗、细菌培养物、养殖池塘水、环境等样品中罗非鱼无乳链球菌

和海豚链球菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

SC/T7014水生动物检疫实验技术规范

SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适合本文件。

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

Ct值：阈值循环数（Cyclethreshold）。

DNA：脱氧核糖核酸（Deo