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丹青不知老将至，贫贱于我如浮云。——杜甫
半乳糖醛酸标准品（分析纯），果胶标准品.
果胶酶活力的测定
果胶酶活力单位1g或1mL酶液在50℃、pH5.0的条件下,1h分解果胶产生1mg半乳糖
醛酸为一个酶活单位。
半乳糖醛酸标准曲线制作精确称取1.000g半乳糖醛酸,用缓冲溶液定容至1000mL,获得1
mg/mL的半乳糖醛酸溶液。取9支25mL的刻度试管编号,并按表1加入各种试剂。制备酶
液:吸取1mL浓缩酶液于一定体积的容量瓶中,用缓冲溶液定容。
加入试剂后在混合振荡器上振荡均匀,在沸水浴中加热5min,取出后立即用流水冷却,加蒸馏
水定容至25mL(以1号试管作为空白调零),在540nm波长下比色测定吸光度。以吸光度纵
坐标,半乳糖醛酸含量为横坐标,绘制标准曲线。
酶活力测定步骤①于甲、乙两支25mL比色管中分别加入果胶底物5mL,在50℃水浴中预
热5min;②于甲、乙管中分别加4mL磷酸-柠檬酸缓冲液,甲管中加入1mL稀释酶液,立即摇
匀,在50℃水浴中准确反应30min,立即给乙管中加1mL稀释酶液,立即放入沸水浴中煮沸
5min,终止反应,冷却;③分别取甲、乙管中反应液2mL于两支25mL比色管中,再分别给甲、
乙管加2mL蒸馏水,5mLDNS试剂,混合,沸水浴煮沸5min,取出,立即冷却。加蒸馏水定容到
25mL。3600r/min离心8min,取上清液,以标准空白为基准调零,在540nm处测吸光度(吸光
度要在0.025~0.843之间,否则重新稀释)。
酶活力计算:X=[(A甲-A乙)×Dr×5]/(K×t)式中,A甲为酶样吸光度;A乙为酶空白样的吸光
度;K为标准曲线斜率;5为测定酶活时取了反应液的1/5;Dr为稀释倍数;t为反应时间(h)。
.壳聚糖固定化酶的制备
准确称取壳聚糖1.0g溶于2%的醋酸中磁力搅拌.均匀后逐滴滴加0.25mol/LNaOH溶液
至pH值7.0加入5%戊二醛并磁力搅拌10h静置1h4800r/min离心15min用蒸馏水清
洗直到中性为止将戊二醛交联后的壳聚糖加入到果胶酶液中缓慢震荡反应30min后于
4下固定12h以上并用蒸馏水将未固定的果胶酶清洗干净最终得到壳聚糖固定化果胶酶
产品
相对酶活力：以酶活力最大值为100%，其余数值与其对比，即相对酶活力，以质量分数表
示。固定化酶活力回收率=（固定化酶总活力/加入游离酶总活力）×100%。
.
固定化酶活测定方法
羧甲基纤维素（CMC）法.
：称取4.0g固定化酶，加入用缓冲液配制的1.0%CMC，在50的恒温振荡器中保温30min，
加入5mLDNS溶液沸水浴反应5min，冷却后加入15mL去离子水，于波长550nm处测定
其吸光度值酶活计算和酶活回收率：通过标准曲线将吸光度值换算为生成的葡萄糖量，根据
下列公式计算固定化酶活以及酶活回收率固定化酶活计算公式：
非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮
.
取适量纤维素酶液，加到3mL质量分数为3．5%的海藻酸钠溶液中，混合均匀，再
加入适量戊二醛溶液，在摇床中恒温振荡，用5mL注射器吸取混合液，以10cm左右
高度逐滴注入质量分数为2%的CaCl2溶液中，
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