2025年重庆大学考研分子生物学题库+答案 .pdfVIP

饭疏食，饮水，曲肱而枕之，乐亦在其中矣。不义而富且贵，于我如浮云。——《论语》

高级分子生物学

1.试述利用基因工程的技术调控基因表达的主要方法

原位杂交技术

原位杂交(InSituHybridization,ISH)是用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织、细

胞、间期核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。通常可以分为两大类：

1、RNA原位杂交：用放射性或非放射性(如地高辛、生物素等)标记的特异性探针与被固定的组织切片反应，

若细胞中存在与探针互补的mRNA分子，两者杂交产生双链RNA，就可以通过检测放射性标记或经酶促免疫

显色，对该基因的表达产物在细胞水平上作出定性定量分析；

2、荧光原位杂交(FluorescenceInSituHybridization,FISH)：首先对于寡核苷酸探针做特殊修饰和标记，

然后用原位杂交法与靶染色体或DNA上特定的序列结合，再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体来确定该

DNA序列在染色体的位置。

定点突变技术

定点突变是重组DNA进化的基础，该方法通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列，

常用于研究某个氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响，也可用于改造DNA调控元件

特征序列、修饰表达载体、引入新的酶切位点等。

RNAi技术

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA，从而阻

断体内靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。其过程一般为：

1、在Dicer的参与下，细胞中的双链RNA首先被降解形成21-25个核苷酸的小片段双链RNA(siRNA)；

2、siRNA中的反义链指导合成一种被称为RNA诱导的沉默复合体(RISC)的核蛋白体；

3、RISC再介导切割目的mRNA分子中与siRNA反义链互补的区域，从而实现干扰基因表达的功能。

2.论述原核生物和真核生物基因表达调控的异同

答：1、真核生物基因组大,染色体数量多,且结构复杂,存在基因家族和断裂基因；原核生物基因组小,染色体

数量少,结构简单,有重叠基因和操纵子结构，基因表达调控可以在复制、扩增、基因激活、转录、转录后、翻译

和翻译后等多级水平上进行,但转录水平调控是主要的。真核生物基因表达调控机制发生在染色体活化、基因转

录激活、转录后加工、翻译及翻译后加工等多水平的调节，事件也复杂的多。

2、真核生物基因表达以正调控为主，基因的转录与染色质的结构变化相关,真核基因转录发生在细胞核(线

非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮

粒体基因的转录在线粒体内),需对内含子精确剪接加工，翻译则多在胞浆,两个过程是分开的。基因表达调控的

环节比原核生物更多。原核生物中,营养条件和环境因素对基因表达调控起举足轻重的作用，mRNA在形成过程

中与核糖体混合在一起，即转录和翻译过程相耦联。

3.简述α互补筛选（蓝白斑筛选）

适用于含有半乳糖苷酶基因（LacZ）的载体，如pUC系列等，其原理是：载体含有LacZ的调控序列和N

端146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点。当这种载体进入可编码β-半乳糖苷酶C

端部分序列的宿主细胞后（质粒和宿主细胞编码的片段各自都没有酶活性），它们可以融为一体，形成具有酶学

活性的蛋白质，这种现象叫α互补。由α互补而产生的Lac+细菌在呈色底物X-gal和诱导剂IPTG存在下形

成蓝色菌落。当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，导致产生无α互补能力的氨基端片段。因此，带有重

组质粒的细菌形成白色菌落。通过呈色反应即可初步识别可能带有重组质粒的菌落。通过小量制备质粒DNA

进行限制酶切分析，即可确定这些质粒的结构。

4.简述菌落PCR筛选

该方法是以转化菌单个克隆为模板，采用特异性引物或通用引物对目的基因进行PCR扩增，然后通过凝胶

电泳等手段来鉴定筛选阳性转化子，最后可以经提取质粒DNA进行酶切和质粒PCR双重鉴定以及测序分析进

一步确认菌落PCR的结果。

5.简述杂交探针技术的原理和方法

在制备好合适的基因文库后，如果用可获得目的基因的