DB21T 2326-2014 猪伪狂犬病毒实时荧光PCR检测方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB21

辽宁省地方标准

21/T23262014

DB—

猪伪狂犬病毒实时荧光PCR检测方法

MethodofrealtimefluozescentPCRforthedetectionofpseudorabiesvirus

2014-07-05发布2014-09-05实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2326—2014

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。

本标准主要起草人：陈瑶、赵晓彤、于学武、赵凤菊、于长泳、张雅为、刘坤洋、杨国丽、邓文超、高

志峰、关淼、李连昭、杨松柏

I

DB21/T2326—2014

猪伪狂犬病毒实时荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪伪狂犬病毒（pseudorabiesvirus，PRV）gG和gE基因的荧光PCR检测方法的实验

技术要求。

本标准适用于PRV的诊断、监测及流行病学调查，适用于猪脏器、血液和细胞培养物中PRV核酸

的检测，以及根据免疫背景对gE基因缺失疫苗毒与野毒感染的鉴别检测。

本标准中的试验操作应在生物安全Ⅱ级（BSL-2）以上的实验室进行。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

兽医实验室生物安全技术管理规范

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

PRV：猪伪狂犬病毒（pseudorabiesvirus）

HSTaq酶：热启动TaqDNA聚合酶(HSTaqDNApolymerase)

Ct值：达到阈值的循环数(cyclethreshold)

DNA：脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

荧光PCR：荧光聚合酶链式反应(realtimefluozescentquantitativepolymerasechainreaction)

PBS：磷酸缓冲液（phosphatebuffersolution）

4原理

SYBR®GreenⅠ是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，能与通过PCR反应产生的双链DNA非特异

性结合，结合后发出荧光，通过检测反应体系中SYBR®GreenⅠ荧光强度，同时测定扩增产物DNA的

熔解温度，分析PCR扩增产物的单一性，以达到检测PCR产物扩增量的目的。

5仪器和器材

5.1仪器

分析天平、高速离心机、荧光PCR扩增仪、-70℃冰箱、-20℃冰箱、水浴锅、可调移液器（最大

量程为2μL，20μL，200μL，1000μL）。

5.2器材

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