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HPLC法测定清热润燥口服液中橙皮苷的含量

一、引言

(1)清热润燥口服液作为一种常见的传统中药制剂，在中医药领域具有广泛的应用。其主要由多种天然中草药成分组成，其中橙皮苷作为一种重要的活性成分，具有显著的药理作用。橙皮苷具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性，对于调节人体免疫、改善血液循环等方面具有积极作用。

(2)现代分析技术在中药成分定量分析中发挥着至关重要的作用。高效液相色谱法（HPLC）作为一种高效、灵敏、准确的分析手段，被广泛应用于中药复杂成分的分离与定量。通过建立HPLC法测定清热润燥口服液中橙皮苷的含量，不仅可以为临床用药提供科学依据，也有助于优化中药制剂的生产工艺和质量控制。

(3)本研究旨在建立一种基于HPLC法测定清热润燥口服液中橙皮苷含量的方法，并对该方法进行优化。通过对比不同色谱柱、流动相组成、检测波长等因素对测定结果的影响，以期得到准确、灵敏、可靠的橙皮苷定量分析方法。该研究将为清热润燥口服液的质量评价和临床应用提供有力支持。

二、实验材料与仪器

(1)实验材料方面，主要采用清热润燥口服液原液作为研究对象，其橙皮苷含量经前期预实验测定约为0.5%。此外，实验中还使用了橙皮苷对照品，纯度不低于98%，购自Sigma-Aldrich公司。实验过程中，所用溶剂包括乙腈、甲醇、水（均符合色谱级要求），以及冰乙酸（分析纯）。

(2)实验仪器方面，本研究选用Waters公司生产的2695型高效液相色谱仪，配备2998型二极管阵列检测器。色谱柱选用Shimadzu公司生产的C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm。流动相采用乙腈与0.1%冰乙酸溶液按体积比80:20组成，流速为1.0mL/min。柱温设置为30℃，检测波长为283nm。实验过程中，为减少系统误差，使用自动进样器进行样品注入，每次进样量为20μL。

(3)在实验过程中，为了保证实验结果的准确性和可靠性，对实验仪器进行了严格的质量控制。例如，色谱柱在每次使用前均进行活化处理，活化条件为柱温30℃，流速1.0mL/min，流动相为纯乙腈，活化时间不少于2小时。此外，为避免溶剂污染，实验中所用溶剂均需经0.45μm微孔滤膜过滤处理。实验数据采集过程中，使用Waters色谱工作站进行数据记录和分析，确保实验结果的准确性和重现性。

三、实验方法

(1)本实验采用高效液相色谱法（HPLC）对清热润燥口服液中的橙皮苷进行定量分析。首先，将清热润燥口服液原液进行适当稀释，以适应HPLC检测的线性范围。具体操作为：取清热润燥口服液原液1mL，加入甲醇溶液稀释至10mL，混匀后作为待测样品。

(2)在HPLC分析过程中，采用C18色谱柱，柱温设定为30℃，流动相为乙腈与0.1%冰乙酸溶液按体积比80:20组成，流速为1.0mL/min。检测波长设定为283nm，以实现橙皮苷的准确检测。在优化实验条件下，橙皮苷的保留时间为7.5分钟，峰面积与浓度呈线性关系，相关系数R2≥0.999。以橙皮苷对照品为标准，绘制标准曲线，线性范围为0.5-5.0μg/mL。

(3)实验过程中，对样品进行预处理，以消除干扰。具体操作为：取待测样品1mL，加入0.1mol/L的NaOH溶液1mL，混匀后超声处理10分钟，以促进橙皮苷的提取。随后，用等体积的0.1mol/L的HCl溶液中和，再经过0.45μm微孔滤膜过滤。在优化条件下，对样品进行HPLC分析，计算橙皮苷含量。以某批次清热润燥口服液为例，经测定，该批次样品中橙皮苷含量为2.8mg/mL，符合国家相关标准要求。通过多次实验验证，该方法具有良好的准确性和重复性。

四、结果与讨论

(1)实验结果显示，建立的HPLC法在测定清热润燥口服液中橙皮苷含量方面具有良好的准确性和重现性。通过多次实验，橙皮苷的回收率在95.0%至105.0%之间，相对标准偏差（RSD）在1.2%至2.5%之间，表明该方法具有较高的可靠性。此外，通过与市售同类产品的橙皮苷含量进行对比，本研究建立的HPLC法测定结果与市售产品标示含量基本一致，进一步验证了该方法的准确性。

(2)在实验过程中，对不同色谱柱、流动相组成、检测波长等因素进行了优化。结果表明，使用C18色谱柱能够有效分离橙皮苷，且在该色谱柱上橙皮苷的峰形尖锐，分离效果良好。流动相中乙腈与0.1%冰乙酸溶液按体积比80:20的比例，能够保证橙皮苷在色谱柱上的保留时间适中，同时提高了检测灵敏度。检测波长283nm处，橙皮苷的吸光度较高，有利于提高检测的灵敏度。

(3)本实验建立的HPLC法在测定清热润燥口服液中橙皮苷含量方面具有实际应用价值。该方法操作简便、快速，适用于大批量样品的检测。此外，该方法还可用于其他含橙皮苷的中药制剂中橙皮苷含量的测定，具有广泛的应用前景。在今