成瘤性检测 免疫缺陷小鼠检测法.pdfVIP

成瘤性检测免疫缺陷小鼠检测法

I.1仪器和设备

I.1.1血球计数板。

I.1.2明视场显微镜。

I.1.3水平离心机。

I.2试剂

本方法所用试剂均为分析纯，除特别说明外，实验用水均为GB/T6682规定的一级水。

I.2.1磷酸盐缓冲液：pH为7.4。

I.2.20.25%EDTA-胰酶。

I.2.3台盼蓝染液：使用时，用磷酸盐缓冲液（I..2.1）稀释至0.4%（质量浓度）。

I.3检测步骤

I.3.1细胞样品的准备

I.3.1.1细胞消化

使用水平离心机（I.1.3）离心收集细胞于离心管中，用无菌磷酸盐缓冲液轻轻重悬细胞，避

免形成气泡或者残留细胞团块。

I.3.1.2细胞计数

根据附录A方法测定，使用血球计数板（I.1.1）及明视场显微镜（I.1.2）计算马间充质干细

胞悬液活细胞浓度。

I.3.2细胞移植

将1×107个马间充质干细胞注射到6至8周龄的免疫缺陷型小鼠皮下，设置空白对照组（空

白组注射与产品对应的溶媒）、阴性对照组（马二倍体细胞）、阳性对照组（马肿瘤细胞系，按照肿

瘤细胞系接种要求的数量注射）。

I.3.3肿瘤观察