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Caco-2细胞模型用于乳源ACE抑制肽LL、LPEW的小肠吸收研究
一、实验材料与方法
实验材料：
实验中使用的Caco-2细胞来源于美国典型培养物保藏中心（ATCC），并采用常规的细胞培养方法进行培养。细胞培养基选用MEM培养基，其中包含10%胎牛血清、1%非必需氨基酸、1%抗生素和1%葡萄糖。乳源ACE抑制肽LL和LPEW由我国某生物科技公司提供，其纯度均大于98%。实验中所需的无菌实验器材包括细胞培养瓶、移液枪、离心机、培养箱、显微镜等。所有试剂和耗材均购自国内知名品牌，保证实验的准确性和可靠性。
实验方法：
Caco-2细胞的培养采用常规的细胞培养技术，将细胞接种于96孔板中，每孔接种1×10^5个细胞。细胞培养条件为37℃、5%CO2、95%空气的恒温培养箱中。待细胞生长至对数生长期后，用含有不同浓度乳源ACE抑制肽LL和LPEW的MEM培养基进行实验处理。具体操作如下：
(1)将Caco-2细胞用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液消化后，收集细胞悬液，调整细胞浓度至1×10^5个/mL。然后将细胞悬液均匀接种于96孔板中，每孔100μL，放入培养箱中培养24小时。
(2)实验分组：将细胞分为对照组、LL低浓度组、LL中浓度组、LL高浓度组、LPEW低浓度组、LPEW中浓度组、LPEW高浓度组。每组设6个复孔。对照组使用等体积的MEM培养基，其余各组分别加入不同浓度的乳源ACE抑制肽LL和LPEW。
(3)处理：将细胞培养24小时后，将不同浓度的乳源ACE抑制肽LL和LPEW加入各孔中，继续培养48小时。
(4)收集上清液：在培养结束前4小时，向每个孔中加入10μLMTT溶液，继续培养4小时。培养结束后，加入DMSO溶解MTT形成的紫色结晶，于酶标仪测定各孔的吸光度（OD值）。
(5)数据分析：使用SPSS22.0软件对实验数据进行统计分析，采用单因素方差分析（One-wayANOVA）检验各组间差异的显著性，以P0.05为差异具有统计学意义。
实验结果：
通过对实验数据的统计分析，发现不同浓度的乳源ACE抑制肽LL和LPEW对Caco-2细胞的生长具有显著影响。LL低浓度组、LL中浓度组、LL高浓度组、LPEW低浓度组、LPEW中浓度组、LPEW高浓度组的细胞增殖能力均低于对照组。其中，LL中浓度组与LL高浓度组的细胞增殖能力差异显著，LPEW低浓度组与LPEW中浓度组的细胞增殖能力差异显著。这表明乳源ACE抑制肽LL和LPEW在一定浓度范围内对Caco-2细胞的生长具有抑制作用。进一步研究乳源ACE抑制肽LL和LPEW对Caco-2细胞小肠吸收的影响，为进一步开发新型肠道吸收促进剂提供理论依据。
二、Caco-2细胞培养与实验分组
Caco-2细胞培养：
Caco-2细胞是一种广泛用于研究药物和化合物在小肠吸收的细胞系。在实验开始前，首先需对Caco-2细胞进行培养。将Caco-2细胞接种于6孔板中，每孔加入2mL含有10%胎牛血清的MEM培养基，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。细胞培养至对数生长期时，进行传代培养。具体操作如下：
(1)使用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液消化Caco-2细胞，待细胞变圆后，加入适量培养基终止消化。
(2)将消化后的细胞悬液离心，弃去上清液，加入新鲜培养基重悬细胞。
(3)将重悬后的细胞以1:3的比例接种于新的培养皿中，继续培养。
(4)观察细胞生长情况，当细胞铺满培养皿底部时，进行传代培养。
实验分组：
为了研究乳源ACE抑制肽LL和LPEW对Caco-2细胞小肠吸收的影响，本实验将细胞分为以下几组：
(1)对照组：加入等体积的MEM培养基，作为空白对照。
(2)LL低浓度组：加入含有0.1μM乳源ACE抑制肽LL的MEM培养基。
(3)LL中浓度组：加入含有1μM乳源ACE抑制肽LL的MEM培养基。
(4)LL高浓度组：加入含有10μM乳源ACE抑制肽LL的MEM培养基。
(5)LPEW低浓度组：加入含有0.1μM乳源ACE抑制肽LPEW的MEM培养基。
(6)LPEW中浓度组：加入含有1μM乳源ACE抑制肽LPEW的MEM培养基。
(7)LPEW高浓度组：加入含有10μM乳源ACE抑制肽LPEW的MEM培养基。
每组设置6个复孔，以确保实验结果的可靠性。在实验过程中，定期观察细胞生长状态，确保实验条件的一致性。实验结束后，对各组细胞进行MTT实验，测定细胞增殖情况，以评估乳源ACE抑制肽LL和LPEW对Caco-2细胞小肠吸收的影响。
三、乳源ACE抑制肽LL、LPEW的吸收实验
(1)吸收实验准备：
在实验开始前，首先对Caco-2细胞进行培养，待细胞生长至对数生长期时，进行实验分组。将细胞分为对照组、LL低浓度组、LL中浓度
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