临床检验基础99讲解.ppt

第四讲血涂片染色质量控制血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。染液不能过少，以防蒸发沉淀。冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防止染料沉着。冲洗时间也不能长。染色过淡，可复染。染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色.*鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC临床检验基础资源共享课程*鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC临床检验基础资源共享课程*鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC临床检验基础资源共享课程*鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC临床检验基础资源共享课程鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC临床检验基础目录染色1观察2染色瑞氏染色法01姬姆萨染色法02瑞氏-吉姆萨染色03染色方法01瑞氏染色法PartOne1碱性染料为阳离子染料，能接受质子，细胞核的染料。如亚甲蓝、天青。能结合酸性物质并染色，如淋巴细胞及嗜碱性粒细胞染成蓝色2酸性染料为阴离子染料，能释放质子。如伊红。能结合细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等染成红色。染料组成毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等物理作用a.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其它活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。c.周围环境的酸碱度：如环境pH＜pI，则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH＞pI，则结合碱性染料。化学作用原理图1-4瑞氏染色原理示意图嗜碱性粒细胞试剂01瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0mlWright染液02有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态。增加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。甲醇：03（PBS，pH6.4-6.8）：磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g,蒸馏水加到1000ml。磷酸盐缓冲液用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。A加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。B滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10分钟。C用清水冲洗，待干后镜检。。D染色方法中性杆状核粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞02姬姆萨染色法PartTwo原理吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液，按瑞特染色法染10min。或先用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。吉姆萨染料1.0g甘油66.0ml甲醇（AR）66.0ml[染色方法]1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.将血膜在染液中浸染10-30min3.流水冲洗,待干后镜检试剂03瑞氏-吉姆萨染色PartThree*鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC临床检验基础资源共享课程*鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC临床检验基础资源共享课程鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC