细胞培养及材料细胞毒性检测.ppt

细胞计数每毫升细胞数血细胞计数板第28页，共47页，星期日，2025年，2月5日细胞生长的指标细胞生长曲线贴壁率有丝分裂指数(MI)：分裂相数量占全部细胞数量的百分比细胞群体倍增时间四唑盐(MTT)比色法标记胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入量第29页，共47页，星期日，2025年，2月5日细胞活力测定细胞活力：总细胞中活细胞所占的百分比台盼蓝法四唑盐(MTT)比色法荧光素双乙酸酯法(FDA)第30页，共47页，星期日，2025年，2月5日四唑盐（MTT）比色法MTT比色法的原理：活细胞中琥珀脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物甲臢（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。甲臢染料在A570nm处产生吸收值，用酶标仪测定A值。第31页，共47页，星期日，2025年，2月5日细胞培养的其他指标细胞大小：显微测微计法细胞重量：称重法鲜重干重第32页，共47页，星期日，2025年，2月5日细胞固定与染色细胞固定苏木精-伊红染色Giemsa染色Feulgen染色考马斯蓝染色免疫法细胞核染色：Hoechst、DAPI第33页，共47页，星期日，2025年，2月5日细胞污染混浊、pH异常改变、细胞外形模糊、漂浮的集落细胞出现增殖缓慢或死亡化学物质的污染非同种细胞污染微生物污染：细菌、真菌、支原体、病毒5.细胞培养的污染和检测第34页，共47页，星期日，2025年，2月5日关于细胞培养及材料细胞毒性检测第1页，共47页，星期日，2025年，2月5日WilhelmRoux(1850-1924)1885年Roux最早尝试使组织离体培养，材料是鸡胚神经板，采用生理盐水为培养液，并首次采用组织培养这个术语。1.前言第2页，共47页，星期日，2025年，2月5日AlexisCarrelFranceRockefellerInstituteforMedicalResearch

NewYork,NY,USAb.1873

d.19441907年Harrison和1912年Carrel开始把组织培养作为一种方法，用于研究离体动物细胞的培养。他建立的鸡胚胎成纤维细胞持续了34年之久(1912-1946)第3页，共47页，星期日，2025年，2月5日器官培养(Organculture)：将活体中整个器官或一部分器官取出，置于体外生存、生长并同时保持其一定的结构和功能特征。组织培养(Tissueculture)：把活体的一小片组织（O.5～1立方毫米）置于底物上孵育，细胞自其周围移出并生长。细胞培养(cellculture)：把提取的组织用机械或消化的方法分散成单个细胞悬液，后进行培养，增殖。2.基本概念肿瘤胚胎成体粗切消化细切修切细胞培养组织培养器官培养第4页，共47页，星期日，2025年，2月5日细胞培养的优点活细胞便于观察检测条件可控均一性便于人工筛选第5页，共47页，星期日，2025年，2月5日培养细胞与体内细胞的差异失去原有组织结构和形态，趋向单一性分化减弱可能获得不死性第6页，共47页，星期日，2025年，2月5日体外培养细胞的生长类型贴壁型：动物的正常细胞悬浮型：血液淋巴细胞、肿瘤细胞、植物细胞固定化培养第7页，共47页，星期日，2025年，2月5日来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，内皮细胞形态：似体内成纤维细胞的形态胞体梭形或不规则三角形胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核成纤维细胞样细胞第8页，共47页，星期日，2025年，2月5日生长特点：排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片，细胞—细胞接触易断开而单独行动第9页，共47页，星期日，2025年，2月5日培养细胞的生长和增殖过程原代细胞：从机体取出后立即培养的细胞原代培养：将从体内取出的细胞进行培养传代培养：从原代培养细胞继续转接培养传代细胞：在体外培养条件下持续传代培养的细胞第10页，共47页，星期日，2025年，2月5日细胞培养的工作原则无菌无毒、生物相容性清洁的环境品质良好的细胞来源