植物组织中总糖及还原糖的测定.ppt

实验一植物组织中总糖及还原糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法学时：3掌握还原糖和总糖测定的基本原理。掌握比色法测定还原糖的操作方法。0102一、实验目的：单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）；多糖为非还原糖。还原糖：指含有游离的半缩醛(酮)基糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。总糖的提取及双、多糖的酸水解。二、实验原理:2、还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应：在碱性条件下，还原糖与DNS试剂反应，还原糖被氧化成糖酸及其它产物，DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色,A540)3,5-二硝基水杨酸(DNS)在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质(3-氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。01由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。02三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：苹果（约0.5g）2、仪器：水浴锅；可见分光光度计等。3、试剂：（1）1mg/mL葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂(碱性)（3）6MHCl和6MNaOH01葡萄糖标准曲线的绘制03样品含糖量的测定:02还原糖的提取四、实验步骤：1、葡萄糖标准曲线的绘制:

取7支试管，按下表操作，以标准葡萄糖含量为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。管号葡萄糖标准液mL蒸馏水mLDNSmL沸水浴光密度值OD540nm葡萄糖含量（μg）0(参比溶液)011.05min冷却0.114010.20.820020.40.640030.60.460040.80.280051.0010001.0mlχ1还原糖提取液蒸馏水mL4取0.5g样品于研钵中，加水2-3ml，充分研磨。01用2-3ml蒸馏水分三次冲洗研钵(总体积小于10ml)，转入试管中。02在50℃水浴中恒温20分钟，冷却后于3000转离心5分钟。03取上清转入试管中，用蒸馏水定容20毫升，待测。042、还原糖的提取样品含糖量的测定:取提取液1.0ml，按上表操作。*