DB22T 3455-2023 分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒检测 实时荧光PCR法　.pdfVIP

ICS65.020

CCSB05

DB22

吉林省地方标准

DB22/T3455—2023

分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒检测实时荧光

PCR法

Detectionofonionyellowdwarfvirusbyreal-timePCRonShallot

2023-02-27发布2023-03-27实施

吉林省市场监督管理厅发布

DB22/T3455—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》和GB/T

20001.4—2015《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的规定起草。

请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：吉林省农业科学院。

本文件主要起草人：李小宇、张春雨、王海鹏、王永志、苏颖、李建平、张金花、杨阳、于红。

I

DBXX/XXXXX—XXXX

分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒检测实时荧光PCR法

警告─使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件描述了分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒实时荧光PCR检测方法。

本文件适用于分蘖洋葱中洋葱黄矮病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过中文的规范性引用而构成本文件的必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用

于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T28067甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法

3术语和定义

GB/T28067界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

比对洋葱黄矮病毒外壳蛋白基因，设计一对仅在洋葱黄矮病毒外壳蛋白基因间保守的特异性引物。

提取分蘖洋葱总RNA，在反转录酶作用下反转录成cDNA，并以其为模板，利用Taq酶进行实时荧光PCR

扩增反应（采用SYBRGreenⅠ荧光染料方法）。SYBRGreenⅠ是一种具有绿色激发波长的染料，能

够与双链DNA小沟区域结合。游离状态的SYBRGreenⅠ只发出微弱的荧光，当与双链DNA结合后，

荧光强度会显著增加，而且荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。

5试剂或材料

5.1试剂

5.1.1水：符合GB/T6682-2008中一级水的要求。

5.1.2Trizol核酸提取试剂盒。

5.1.3反转录试剂盒。

5.1.4实时荧光PCR试剂盒。

5.1.5DEPC（焦炭酸二乙酯DiethyPyrocarbonate）。

5.1.6三氯甲烷。

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5.1.7异丙醇。

5.1.8无水乙醇。

5.1.9DEPC处理的水。

5.1.10DEPC处理的75%乙醇：无水乙醇（含量≥99.8%）与DEPC处理的水