人成纤维细胞成瘤性检测 裸鼠皮下接种法.pdfVIP

人成纤维细胞成瘤性检测裸鼠皮下接种法

D.1仪器和设备

D.1.1荧光细胞分析仪

荧光细胞分析仪应按照JJF1665要求进行仪器校准。

D.1.2细胞计数板

应使用细胞技术仪适配的细胞计数板。

D.1.3水平离心机

应符合GB19815标准要求。

D.2试剂

D.2.1除另有说明外，所有试剂均为分析纯，检测用水均为符合GB/T6682要求的一级水。

D.2.2磷酸盐缓冲液：按照A.2.2配制，并进行高压蒸汽灭菌。

D.2.3消化酶。

D.2.4AO/PI染液：吖啶橙和碘化丙锭染料。

D.3检测步骤

D.3.1细胞消化

人真皮成纤维细胞贴壁培养，汇合度达到80%以上时，用消化酶消化，用水平离心机（D.1.3）300

×g，离心4min，弃去上清液，用磷酸盐缓冲液（D.2.2）重悬细胞。

D.3.2细胞计数

按A.3.3进行，使用细胞计数板（D.1.2）及荧光细胞分析仪（D.1.1）计算细胞悬液活细胞浓度，

根据计数浓度，调整细胞密度至5×10个细胞/mL。7

D.3.3细胞移植

实验组：将1×10个人真皮成纤维细胞活细胞，注射到6至8周龄的免疫缺陷型小鼠皮下，空白对照7

组不做处理，阳性对照组：人肿瘤细胞系，按照