DB21T 3794-2023 水质 底栖动物鉴定 DNA条形码法　.docxVIP

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DB21

辽宁省地方标准

DB21/T3794—2023

水质底栖动物鉴定DNA条形码法

WaterQuality—IdentificationofMacrobenthos—DNABarcoding

2023-08-30发布2023-09-30实施

辽宁省市场监督管理局发布

I

DB21/T3794—2023

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 2

5方法原理 3

6试剂和材料 3

7仪器和设备 4

8样品 4

9分析步骤 4

10结果计算 7

11质量保证与质量控制 7

12废物处理 8

13注意事项 8

附录A（资料性）序列搜索与比对 9

附录B（资料性）进化树的构建与遗传距离的计算 11

参考文献 13

II

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省生态环境厅提出并归口。

本文件起草单位：辽宁省生态环境监测中心。

本文件主要起草人：丁振军、李杨、姜永伟、王星蒙、问青春、王秋丽、张爽、胥学鹏、张峥、卢雁。

本文件为首次发布。

本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

归口管理部门通讯地址：辽宁省生态环境厅（辽宁省沈阳市浑南区双园路30甲），联系电话：024

文件起草单位通讯地址：辽宁省生态环境监测中心（辽宁省沈阳市浑南区双园路30甲-3），联系电话：024

1

DB21/T3794—2023

水质底栖动物鉴定DNA条形码法

警告：EB溶液具有遗传毒性，操作时应按规定要求佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。

1范围

本文件规定了利用DNA条形码技术鉴定底栖动物的方法。本文件适用于河流、湖泊和水库中底栖动物的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T30989高通量基因测序技术规程

HJ710.8生物多样性观测技术导则淡水底栖大型无脊椎动物T/CSES81淡水生物监测环境DNA宏条形码法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

底栖动物macrobenthos

指生活史的全部或至少一个时期栖息于水体底部或底部基质中的不能通过0.5mm（40目）孔径网筛的无脊椎动物。

[来源：HJ710.8-2014，3.2，有修改]3.2

细胞色素c氧化酶亚基IcytochromecoxidasesubunitI，COI

后生动物线粒体基因组上的线粒体细胞色素c氧化酶亚基I对应的DNA序列。[来源：T/CSES81-2023，3.7，有修改]

3.3

引物primer

在DNA复制过程中，结合于模板链上并作为复制延伸的起始位点和/或终止位点的，具有一定长度和顺序的寡核苷酸链。

[来源：GB/T30989-2014，3.11]3.4

退火annealing

模板双链DNA经热变性、双螺旋解开成单链后，通过缓慢冷却到特定温度，使引物与该模板DNA

2

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单链重新配对，形成新的双链分子的过程称为退火。3.5

聚合酶链式反应polymerasechainreaction，PCR

模板DNA先经高温变性为单链，在DNA聚合酶和适宜的温度下，两条引物分别与模板DNA两条链上的一段互补序列发生退火，接着在DNA聚合酶的催化下以四种dNTP为底物，使退火引物得以延伸，如此反复变性、退火和DNA合成这一循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。

[来源：GB/T30989-2014，3.14]3.6

降落PCRtouchdownPCR，TDPCR

一种退火温度逐渐