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分子生物学检验技术
质量控制
贯穿检验全流程
目录
CONTENTS
实验室管理指南
《医疗机构临床实验室管理办法》（卫医发[2006]73号）
《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发[2010]194号）
医学实验室质量和能力认可准则ISO15189（CNAS-CL02）
医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的指南（CNAS-GL26）
实验室管理指南
人员比对验证
仪器比对验证
试剂验证、自配试剂验证
试剂比对、方法比对
实验室环境验证
实验室要求
实验室要求
设施与环境
四个区域（试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区）必须是互相独立的；
各区间不能直通，应有缓冲间；
应有充分合理的空间、良好的照明、通风和空调设备（不能使用中央空调）；
标本制备区有生物安全柜、冲眼器；
除移动紫外灯外，各工作区域内应有固定于房顶的紫外灯；
传递窗；
临床基因扩增检验质量控制
检验前
检验中
检验后
医生报告单申请、患者准备、标本（采集、运送、验收、保存）
样本分样、仪器、核酸提取、核酸扩增、产物分析、检测的有效性判断
试验报告、报告传递、结果的接收、结果的审核、结果解释
临床基因扩增检验质量控制
检验前
知情同意：是医方履行如实告知义务的证据也是患者行使选择权的书面依据。
报告单申请：患者的唯一标识；原始类型和解剖部位；申请项目；临床资料；采集日期等。
患者准备、标本（采集、运送、验收、保存）。
临床PCR检验标本
的采集和质量控制
PART01
标本
标本的类型的选择
遗传检验项目：常规标本：外周血、血斑、尿液、唾液；产前诊断样本：羊水、绒毛及脐血。
肿瘤个体化检测项目：血浆样本，新鲜组织（包括手术和活检组织），石蜡包埋组织、胸水、腹水脱落细胞等样本。
药物代谢酶、药物作用靶点基因检测项目：全血、组织标本（新鲜组织、冷冻组织、石蜡包埋组织、穿刺标本）、口腔拭子、骨髓、胸腹水等。
病原体检测项目：血浆、血清、全血、支气管肺泡灌洗液、骨髓、脑脊液、培养的细胞、菌株、尿液、痰液、拭子、乳汁等。
标本的类型的选择
不同标本类型中的病原体，可能是处在不同的生命周期中的病原体，其分子诊断的临床意义可能不同。
如，外周血单个核细胞可用于检测HIV整合如宿主基因组的前病毒DNA（即潜伏病毒）。
血浆用于检测HIV的病毒RNA（即游离病毒）。
而在对HIV感染产妇所生的未满18个月的婴幼儿进行早期诊断时，应选择HIVDNA检测，以免受到母亲以及婴幼儿预防性抗病毒治疗的干扰而影响诊断。
标本的采集
SOP
临床PCR实验室对各种临床标本的收集都建立了标准操体程序（SOP）。标本的采集、运送和保存对检验结果往往有决定性的影响，因此，为保证得到高质量的检验结果，必须有一个规范的临床标本采集、运送和保存的程序。
标本的采集时间
标本的采集时间：标本采集过早或过晚都可能会给出假阴性结果。
标本的采集时间
采样容器
标本的验收、拒收
接收的标本应收集在原始容器中，不能接受从其他检测如生化、免疫检验等分出来的标本，因其有较大的发生标本间污染的可能性。
血清（浆）
分泌物
溶血、严重脂血等应拒收
泌尿生殖道分泌物：镜下应观察到上皮细胞存在
痰液
若镜下观察WBC很少，则没有采集到真正的痰，拒收
标本的运送
实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床标本的运送条件（温度、时间）作出相应规定。
DNA标本
RNA标本
如在无菌条件下，则可以在室温下运送，建议采集后8h之内送至实验室；
如在无菌条件下，可在室温下运送，如为较长时间，则应在加冰条件下运送，建议采集后4h之内送至实验室；
所有临床标本在采集后送至实验室前，均应放2－8℃临时保存。淋病奈瑟菌有自溶的特性，标本采集后应立即送检。
标本的处理
痰液
实验室仪器设备
分册建立仪器档案；
定期维护保养；
定期校准或检定（校准周期、校准单位、校准参数、合格的校准报告）。
PCR仪
结构
维护
温度控制及导热系统、光路系统、检测系统。
75%乙醇定期清洁热盖和反应槽或孔用无水乙醇清洁光路部分。
校准
校准周期：定期校准、仪器搬动
校准参数：光路部分、背景荧光、温控部分（温度准确度、均一性、温度升降速率）。
移液器
维护
校准
75%乙醇擦拭。
校准周期、外校（厂家、计量所）、校准量程。
内部校准
参照《定量、可调移液器试行检定规程》（JJG646-90），注意环境的要求、校准点涵盖试验过程中所涉及的量程。
耗材与试剂
耗材：带滤芯吸头、离心管爆管和抑制物质检。
试剂盒的质检：包括外观质检和性能质检。
选择或更换试剂品牌：试剂性能评估。
更换试剂批号：评价核酸提取效率和扩增效率。
更换试剂批号质检
设置空白对照、阴性对照、低值阳性对照。
试剂不合格
低值阳性对照和标准品均未检出，或低值
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