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操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰
HPLC操作规程和注意事项
一、操作规程
1.准备工作
(1)检查设备：检查HPLC仪器的仪表、进样系统、柱室、检测器等是
否正常工作。
(2)准备试剂：准备好所需的试剂和溶剂，并按照操作要求进行配制。
(3)准备样品：根据需要分析的样品性质，选择适当的提取和前处理
方法，准备好待测样品。
2.仪器操作
(1)打开电源：首先接通HPLC仪器的电源，并预热一段时间，确保仪
器达到稳定状态。
(2)装填柱子：按照操作说明将柱子正确装填到柱室中，并连接好进
样系统和检测器。
(3)刷洗柱子：用纯溶剂将柱子刷洗，至少连续通过10倍柱子体积的
溶液，以去除表面的杂质。
(4)进样：按照分析方法中的要求，设置好进样量和进样方式，确保
样品能够均匀地进入柱子。
3.参数设置
(1)流速：根据分析方法的要求，设置适当的流速，一般应在0.5-
2.0mL/min之间。
操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰
(2)梯度程序：如果需要进行梯度洗脱，按照分析方法中的梯度程序
设置好梯度条件和比例。
(3)柱温：根据样品性质和柱子的要求，设置适当的温度，一般应在
室温到60℃之间。
4.检测和记录结果
(1)检测器选择：根据分析物的性质，选择合适的检测器进行检测，
如紫外检测器、荧光检测器等。
(2)检测条件：根据需要测量的物质，设置合适的检测波长、增益和
灵敏度等参数。
(3)记录数据：及时记录分析结果和数据，包括进样量、保留时间、
峰面积等，以备后续分析和比对。
二、注意事项
1.安全操作
(1)使用个人防护装备，如实验手套、安全眼镜和实验服。
(2)注意化学品的毒性和腐蚀性，避免接触皮肤和吸入有害气体。
(3)注意防火和爆炸，禁止在实验室中吸烟，并保持实验区域通风良
好。
2.样品制备
(1)样品的准备应尽量避免污染和氧化，以保证结果的准确性。
(2)样品的提取和前处理方法需根据样品特性和分析要求进行优化，
确保提取效率和分析结果的可靠性。
志不强者智不达，言不信者行不果。——墨翟
(3)样品的溶解度要适宜，过高或过低的浓度都会影响分析结果。
3.仪器维护
(1)定期检查和校准仪器，保证仪器的正常工作和准确性。检查柱子
是否损坏，检测器是否灵敏。
(2)柱子的保养和保护：柱子避免过度与有机溶剂接触，尽量采用无
机溶剂进行清洗，保证柱子寿命。
(3)设置适当的流速和压力，避免柱子堵塞或破裂。
4.数据处理
(1)定期备份数据，以防数据丢失或损坏。
(2)对数据进行合理的处理和分析，注意修正峰的质量和峰面积的准
确性。
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