细胞技术方法和传代方法.pptVIP

细胞培养培养细胞的方法细胞的传代方法主要讲2方面问题：培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。血细胞计数器：手工计数细胞Coulter计数仪：人工计数01将血球计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上。03静置3分钟。02将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。细胞计数：镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：01细胞数/ml＝4大格细胞总数/4×1000002注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。03根据细胞生长的恃点，传代方法有3种：01悬浮生长细胞传代02离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。03直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／2一2／3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。04细胞传代方法半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。0102030405贴壁生长细胞传代方法：吸去胰蛋白酶液，加入培养液。4用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液。5吸光培养瓶中的培养液1加入1-2ml0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准）2静置2-10min（显微镜下动态监测）。3