DB37T 2995-2017 副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术　　.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T2995—2017

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术

TechnologyofReal-timePCRAssayInHaemophilusparasuis

2017-08-18发布2017-09-18实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T2995—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。

本标准主要起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。

本标准主要起草人：吴家强、于江、郭立辉、张玉玉、杜以军、李俊、陈蕾、陈智、孙文博、丛晓

燕、时建立、王金宝。

本标准为首次发布。

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DB37/T2995—2017

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术

1范围

本标准规定了副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的要求。

本标准适用于猪血液、组织及细菌培养物中副猪嗜血杆菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

Ct值Cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

HPS:副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)

5仪器与试剂

除非另有说明，在检测中使用的化学试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682的要求。

5.1微量可调移液器(最大量程为10μL、20μL、100μL、1000μL)。

5.2高速冷冻离心机。

5.3荧光定量PCR仪。

5.4水浴锅。

5.5恒温培养箱。

5.6-20℃冰箱。

5.7二级生物安全柜。

5.8超低温冰箱：可控温至-70℃。

5.910mL抗凝采血管。

5.10一次性无菌5mL注射器。

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5.111.5mL无RNA酶离心管。

5.120.2mLPCR薄壁管或八联管。

5.13PBS缓冲液。

5.14SYBRGreenI核酸染料(含酶)。

5.15蛋白酶K(见附录A.1)。

5.1610%SDS液(见附录A.2)。

5.1770%乙醇(见附录A.3)。

5.18引物：P1:5-ACCAGAAGCAAACCCAGAGC-3,P2:5-ACACCGCTTGCCATACCCTC-3。

5.19标准阳性对照：HPSinfB基因阳性质粒。

5.20标准阴性对照：无菌超纯水。

6方法

6.1样品采集

6.1.1活体采样：无菌采集抗凝血。

6.1.2病死猪采样：无菌采