DB34_T 3987-2021 禽白血病病毒细胞培养分离检测技术规程.docxVIP

ICS11.220CCSB41

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安徽省地方标准

DB34/T3987—2021

禽白血病病毒细胞培养分离检测技术规程

Technicalregulationsforcellculture,isolationanddetectionofavianleukemiavirus

2021-09-03发布2021-10-03实施

安徽省市场监督管理局发布

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DB34/T3987—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、桐城市畜牧兽医管理中心、合肥市动物疫病预防与控制中心、肥西县农业综合行政执法大队、滁州市动物疫病预防与控制中心、望江县畜牧兽医技术推广中心、宣城市动物防疫站、安徽省动物疫病预防与控制中心、安徽省新联禽业股份有限公司、阜南县农业农村局、池州市动物疫病预防与控制中心。

本文件主要起草人：沈学怀、王华付、司宏富、董先敏、季晶晶、胡江苗、程帮照、潘孝成、戴银、张丹俊、尹磊、赵瑞宏、胡晓苗、钱昌银、刘华、陈辉、翟银建、江美莲。

DB34/T3987—2021

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禽白血病病毒细胞培养分离检测技术规程

1范围

本文件规定了禽白血病病毒细胞培养分离检测的血浆、精液、蛋清和肛拭子样品处理与接种、细胞样品的检测等技术内容和要求。

本文件适用于禽白血病净化中血浆、精液、蛋清和肛拭子样品中禽白血病病毒的细胞培养分离检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T26436禽白血病诊断技术

GB/T36873原种鸡群禽白血病净化检测规程

NY/T680禽白血病病毒P27抗原酶联免疫吸附试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

禽白血病病毒avianleukosisvirus，ALV

ALV属于反转录病毒科的ɑ反转录病毒属。ALV可分为A～J10个亚群，其中A、B、C、D、E和J亚群病毒与鸡的禽白血病相关，可诱发鸡不同组织的良性和恶性肿瘤。

A、B、C、D和J亚群属外源性ALV，与禽白血病的不同类型肿瘤发病相关。

E亚群病毒为内源性病毒，其致病性很低或没有致病性。

3.2

鸡胚成纤维细胞系DF-1chickenembryofibroblastcelllineDF-1

为鸡胚成纤维细胞的自发永生化细胞系。

4接种样品的准备

4.1血液样品的准备

4.1.1血液的采集

用消毒酒精棉球对鸡翅下静脉部位进行消毒，使用1mL一次性注射器或真空采血管进行采血，使用1mg/mL肝素钠作为抗凝剂。使用1mL注射器时先吸入0.1mL肝素钠，采血至1mL，或使用含肝素钠抗凝剂的真空采血管采血1～2mL。

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4.1.2血浆的分离与保存

采集的鸡抗凝血样品应保存在4℃环境下，采集的鸡血液样品应尽快处理并接种DF-1细胞，保存期限最长不超过6h，否则应重新采样。将鸡抗凝血样品转移至灭菌离心管中，2000r/min离心2min，备用。

4.2公鸡精液样品的准备

4.2.1公鸡精液的采集

应按照GB/T36873中规定的方法进行种公鸡精液的采集。

4.2.2公鸡精液样品的保存与处理

采集的公鸡精液样品应保存在4℃环境下，保存期限不超过6h。在无菌的1.5mL的离心管中，加入精液样品40μL，加入精液稀释液160μL，振荡混匀，在4℃条件下10000r/min离心5min，备用。

4.3鸡蛋清样品的准备

4.3.1鸡蛋清样品的采集

清洗和消毒鸡蛋表面，在无菌操作台中，用鸡蛋开孔器在鸡蛋的气室端开口，无菌100μL蛋清样品转移至灭菌离心管中暂存，使用鸡蛋开孔器时应避免样品间交叉污染。

4.3.2鸡蛋清样品的保存与处理

采集的蛋清样品应保存在4℃环境下，保存期限不超过6h。在100uL蛋清样品离心管中加入100μL灭菌PBS，