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动物细胞工程知识点

?一、动物细胞工程概述

动物细胞工程是指以动物细胞为对象，应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。

动物细胞工程主要包括动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎工程等技术领域。这些技术在生物制药、疾病诊断与治疗、良种繁育、环境保护等方面有着广泛的应用。

二、动物细胞培养

（一）概念

动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

（二）培养条件

1.无菌、无毒的环境

对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。

2.营养

合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。

3.温度和pH

适宜温度：哺乳动物多是36.5℃±0.5℃；pH：7.2～7.4。

4.气体环境

主要气体是O?和CO?，O?是细胞代谢所必需的，CO?的主要作用是维持培养液的pH。

（三）基本过程

1.取材

从健康动物体内取出组织块，剪碎。

2.处理

用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理剪碎的组织块，使其分散成单个细胞。

3.接种

将细胞悬液接种到培养瓶或培养皿中，加入适宜的培养基。

4.培养

将培养瓶或培养皿放入培养箱中，在适宜条件下培养，细胞不断生长和增殖。

（四）细胞系和细胞株

1.细胞系

原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，但有极少数细胞度过危机，这些存活的细胞一般能够传到40～50代，这种传代细胞叫做细胞系。

2.细胞株

细胞系传到50代左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞株。

三、动物细胞融合

（一）概念

动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。

（二）原理

细胞膜的流动性。

（三）诱导方法

1.物理法

包括离心、振动、电激等。

2.化学法

常用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。

3.生物法

利用灭活的病毒诱导细胞融合，如仙台病毒等。

（四）过程

1.细胞准备

取两种不同的动物细胞，如小鼠骨髓瘤细胞和免疫的小鼠脾细胞。

2.诱导融合

将两种细胞混合，加入诱导剂，在适宜条件下诱导细胞融合。

3.筛选杂交细胞

利用特定的培养基筛选出杂交细胞，如含有次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶核苷（HAT）的培养基，只有杂交细胞才能生长。

4.克隆化培养

对筛选出的杂交细胞进行克隆化培养，获得稳定分泌所需抗体的细胞株。

（五）意义

动物细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能，为制造单克隆抗体开辟了新途径。

四、单克隆抗体

（一）概念

由单一B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成细胞群，由这些细胞产生的化学性质单一、特异性强的抗体。

（二）制备过程

1.免疫动物

用特定抗原对小鼠进行免疫，使小鼠体内的B淋巴细胞产生相应抗体。

2.细胞融合

取免疫后的小鼠脾细胞（含B淋巴细胞）与骨髓瘤细胞，在聚乙二醇或灭活病毒诱导下进行细胞融合，得到杂交瘤细胞。

3.筛选阳性杂交瘤细胞

利用特定培养基筛选出既能无限增殖又能产生所需抗体的阳性杂交瘤细胞。

4.克隆化培养

对阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养，可采用有限稀释法或软琼脂平板法等，获得多个能稳定分泌特定抗体的细胞株。

5.单克隆抗体的大量制备

将筛选出的细胞株接种到动物体内（如小鼠腹腔）或进行体外培养，从动物腹水或培养液中获取大量单克隆抗体。

（三）优点

特异性强、灵敏度高，并可大量制备。

（四）应用

1.作为诊断试剂

具有准确、高效、简易、快速的优点。

2.用于治疗疾病和运载药物

制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞，又不会伤害健康细胞。

五、胚胎工程

（一）概念

胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如体外受精、胚胎移植、胚胎分