DNA纳米网络结构在肿瘤细胞分型中的应用.pdfVIP

摘要

癌症通常指恶性肿瘤，因其具有高致死率、高转移率和高复发率等特点，严重威胁人类

生命健康，癌症已经成为了中国的第二大死亡因素。随着对癌症的深入研究，研究者已经发

现了多种癌症生物标志物，如核酸分子、离子、氨基酸、蛋白质及多种其他生物分子（ATP、

细菌、气体）等，它们的精准检测能够分析癌细胞自身的状态和产生的特定部位，有助于对

不同临床分期的患者制定适应性治疗策略。准确高效地识别不同类型的癌细胞是精准治疗癌

症的基础。由于不同的细胞亚群共享相同的分子蛋白，因此，多个标记物的准确鉴定对于区

分没有独特标记的癌细胞亚群提供了新的思路。为了有效地实现癌症的早期监测，提高不同

癌症识别的准确度，本文设计了两种基于DNA纳米结构的生物传感器应用于癌细胞分型，具

体如下：

1.根据不同癌细胞的膜蛋白表达的异质性，我们开发了一种新型的DNA网络结构探针，

实现了对不同类型癌细胞的高灵敏分型。通过不同癌细胞表面的特异性蛋白表达量选取三种

核酸适配体探针，三种适配体探针可以分别靶向癌细胞表面过表达的上皮细胞黏附分子

（EpCAM）、跨膜糖蛋白粘蛋白1（MUC1）和人类表皮生长因子受体之一（HER2）。通过适

配体靶向在不同癌细胞表面后，我们分别加入用荧光修饰的H1、H2核酸双链，当识别到靶

向细胞的适配体时，在细胞膜表面构建核酸网络结构引发荧光共振能量转移（FRET）信号，

FRET的信号输出能够避免在复杂样品中产生假阳性信号。通过同时识别不同癌细胞表达蛋

白量的高低产生的荧光信号区别，可以高特异性地进行多种癌细胞分型。该策略为癌症发病

部位和高通量的癌细胞膜蛋白分析提供了一种新的检测思路。

2.根据DNA纳米结构可操控性及核酸适配体高特异性的优势，构建了基于DNA纳米

带框架结构的多价适配体功能化的探针，用于实现乳腺细胞系内多种细胞的膜蛋白表达量检

测以及同系细胞的分型。探针骨架由五条DNA链通过碱基互补配对结合，形成具有多结合位

点的长条状纳米条带结构，其一侧含与核酸适配体结合的互补链，当装载上不同适配体链后，

可用于特异性靶向癌细胞膜表面过表达的蛋白，有序装载多价适配体构建纳米带结构，实现

高效的识别靶向蛋白；另一侧装载FRET网络探针的引发链，当纳米带检测到膜蛋白时，会

靶向在细胞膜表面，这时加入分别用荧光修饰的H1、H2核酸双链后，可引发双链相互杂交

形成膜表面的网络结构，产生FRET信号。针对乳腺细胞系的各种细胞的膜蛋白表达量差异，

探针分别通过对细胞膜表面的两种蛋白信号检测，进行多种癌细胞的分型，探针具有较高的

灵敏度和良好的选择性。我们所设计的多价适配体功能化的基于FRET信号输出的平台响

应动力学快速、抗干扰性好，可以应用于多种靶标的检测及细胞分型中。

关键词:细胞分型，核酸适配体，荧光共振能量转移，膜蛋白检测，DNA纳米结构

Abstract

Canceriscommonlyreferredtoasmalignanttumor,whichhasbecomethesecondleadingcause

ofdeathinChinaduetoitshighmortality,metastasis,andrecurrencerates,posingaseriousthreatto

humanlifeandhealth.Withthedevelopmentofcancerresearch,researchershavefoundavarietyof

cancerbiomarkers,suchasnucleicacidmolecules,ions,aminoacids,proteins,andmanyother

biomolecules(ATP,bacteria,gases),etc.Theaccuratedetectionofbiomarkerscananalyzethestate

ofcancercellsthemselvesandthespecificpartsofproduction,whichishelpfultodevelopadaptive

treatmentstrate