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WB实验试题及答案

单项选择题（每题2分，共10题）

1.WB实验中封闭的主要作用是？

A.增加抗体结合B.减少非特异性结合C.固定蛋白D.清洗杂质

答案：B

2.常用的WB转膜方法是？

A.浸泡法B.半干转C.湿转D.离心转

答案：C

3.一抗孵育的温度一般是？

A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃

答案：A

4.WB实验检测的是？

A.DNAB.RNAC.蛋白质D.多糖

答案：C

5.封闭液中常用的成分是？

A.BSAB.SDSC.EDTAD.Tris

答案：A

6.转膜时，蛋白质从凝胶转移到？

A.滤纸B.硝酸纤维素膜C.塑料膜D.玻璃片

答案：B

7.二抗的作用是？

A.直接结合蛋白B.结合一抗C.标记蛋白D.清洗膜

答案：B

8.丽春红染色的目的是？

A.检测蛋白条带B.检测膜是否转上蛋白C.标记一抗D.标记二抗

答案：B

9.配置SDS凝胶的催化剂是？

A.APSB.TEMEDC.两者都是D.两者都不是

答案：C

10.WB实验中跑胶的目的是？

A.分离蛋白B.结合抗体C.固定蛋白D.标记蛋白

答案：A

多项选择题（每题2分，共10题）

1.WB实验中可能用到的试剂有？

A.丙烯酰胺B.甲醇C.考马斯亮蓝D.脱脂奶粉

答案：ABD

2.影响WB实验结果的因素有？

A.抗体质量B.转膜效率C.封闭时间D.样品上样量

答案：ABCD

3.用于WB实验的蛋白样品制备方法有？

A.超声破碎B.匀浆法C.离心法D.加热法

答案：AB

4.选择二抗时需要考虑的因素有？

A.种属来源B.标记物C.浓度D.颜色

答案：ABC

5.WB实验中常用的显色方法有？

A.ECL发光法B.DAB显色法C.荧光显色法D.银染法

答案：ABC

6.跑SDS凝胶时需要注意？

A.凝胶浓度B.电压C.时间D.缓冲液

答案：ABCD

7.转膜过程中可能出现的问题有？

A.蛋白转膜不完全B.膜上有气泡C.转膜时间过长D.转膜时间过短

答案：ABCD

8.封闭的目的包括？

A.减少背景B.增加抗体特异性C.防止非特异性吸附D.固定蛋白

答案：AC

9.一抗孵育方式有？

A.4℃过夜B.室温孵育C.37℃孵育D.56℃孵育

答案：AB

10.WB实验中蛋白上样前的处理步骤有？

A.加样缓冲液B.煮沸变性C.离心D.稀释

答案：ABC

判断题（每题2分，共10题）

1.WB实验只能检测一种蛋白。（）

答案：×

2.转膜时间越长越好。（）

答案：×

3.一抗和二抗可以随意搭配。（）

答案：×

4.SDS凝胶浓度越高，分离的蛋白分子量范围越大。（）

答案：×

5.封闭时间过短会导致背景过高。（）

答案：√

6.检测小分子蛋白时，凝胶浓度应适当降低。（）

答案：×

7.二抗可以直接用来检测蛋白。（）

答案：×

8.蛋白样品在跑胶前不需要处理。（）

答案：×

9.丽春红染色后膜上的条带和最终检测的蛋白条带位置一致。（）

答案：√

10.不同来源的抗体保存条件相同。（）

答案：×

简答题（每题5分，共4题）

1.简述WB实验基本流程

答案：制备蛋白样品，进行SDS凝胶电泳分离蛋白，转膜将蛋白从凝胶转移到膜上，封闭减少非特异性结合，依次孵育一抗、二抗，最后选择合适的显色方法检测蛋白条带。

2.转膜过程中如何保证转膜效果

答案：确保膜与凝胶贴合紧密无气泡，合理设置转膜条件如时间、电流或电压。根据蛋白分子量选择合适的转膜方法和参数，同时注意缓冲液的配置和使用。

3.封闭液的作用原理是什么

答案：封闭液中的成分如BSA或脱脂奶粉等，能够填充膜上未结合蛋白的空白位点，防止后续加入的抗体非特异性结合到膜上，从而降低背景，提高检测特异性。

4.如何选择合适的一抗

答案：根据待检测蛋白的种属来源、亚型等选择匹配的一抗。查看抗体说明书了解其特异性、效价等参数，参考相关文献中使用的抗体情况，优先选择口碑好、验证多的抗体。

讨论题（每题5分，共4题）

1.WB实验中背景过高可能有哪些原因及解决办法

答案：原因可能是封闭不充分、抗体浓度过高、洗膜不彻底等。解决办法：延长封闭时间或更换封闭液；降低抗体浓度；增加洗