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金黄色葡萄球菌检查用培养基适用性检查验证方案

??一、目的

本方案旨在对金黄色葡萄球菌检查用培养基进行适用性检查验证，以确保培养基能够满足金黄色葡萄球菌生长、鉴定及计数的要求，保证检验结果的准确性和可靠性。

二、范围

本方案适用于金黄色葡萄球菌检查用的胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨肉汤培养基、BairdParker琼脂培养基、营养琼脂培养基、血琼脂培养基等相关培养基的适用性检查验证。

三、职责

1.质量控制部门

负责制定培养基适用性检查验证方案，并组织实施。

对验证结果进行审核和评价，确保培养基符合质量标准要求。

2.微生物实验室

按照验证方案进行培养基的接种、培养、观察等操作。

记录验证过程中的各项数据和结果，并及时反馈给质量控制部门。

3.采购部门

提供验证所需的合格培养基及相关试剂。

确保采购的培养基符合相应的质量标准和供应商资质要求。

四、验证依据

1.《中国药典》2020年版四部通则1105培养基适用性检查指导原则

2.《中国药典》2020年版四部通则1106微生物限度检查法

五、验证前准备

1.菌株

金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，为本实验室标准菌株，由中国食品药品检定研究院购得。

大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]，作为对照菌株，用于验证培养基的选择性和抑制性。

2.培养基及试剂

胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨肉汤培养基、BairdParker琼脂培养基、营养琼脂培养基、血琼脂培养基等，应购自符合资质要求的供应商，且在有效期内。

配套的稀释剂、中和剂、缓冲液等试剂，应符合相应的质量标准。

3.仪器设备

恒温培养箱，温度控制范围为（30～35）℃、（35～37）℃、（37～40）℃，温度波动度不大于±0.5℃。

生化培养箱，温度控制范围为（23～28）℃，温度波动度不大于±0.5℃。

显微镜，放大倍数不低于1000倍。

均质器、振荡器、pH计等常用设备，应定期校准，确保性能良好。

六、验证内容及方法

1.生长性能检查

接种菌液制备

取金黄色葡萄球菌标准菌株接种至胰酪大豆胨肉汤培养基中，在（30～35）℃培养18～24小时，制备成每1ml中含菌数约为10?～10?CFU的菌悬液。

接种与培养

胰酪大豆胨琼脂培养基：分别取上述菌悬液1ml，接种于2个平皿中，倾注约15～20ml已融化并冷却至45～50℃的胰酪大豆胨琼脂培养基，摇匀，凝固后，倒置培养，在（30～35）℃培养24～48小时。

胰酪大豆胨肉汤培养基：取上述菌悬液1ml，接种于2支胰酪大豆胨肉汤培养基中，在（30～35）℃培养18～24小时。

结果观察

胰酪大豆胨琼脂培养基：观察平板上菌落的生长情况，计数菌落数，并记录菌落形态、大小、颜色、边缘等特征。

胰酪大豆胨肉汤培养基：观察培养液的浑浊程度，判断细菌生长情况。

结果判断

胰酪大豆胨琼脂培养基：若平板上生长的菌落数均不低于150CFU，且菌落形态符合金黄色葡萄球菌特征，则判该培养基的生长性能良好。

胰酪大豆胨肉汤培养基：若培养液浑浊，表明细菌生长良好，则判该培养基的生长性能良好。

2.促生长能力检查

接种菌液制备

分别取大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌标准菌株接种至胰酪大豆胨肉汤培养基中，在适宜温度下培养18～24小时，制备成每1ml中含菌数约为10?～10?CFU的菌悬液。

接种与培养

胰酪大豆胨琼脂培养基：分别取上述三种对照菌悬液1ml，接种于2个平皿中，倾注约15～20ml已融化并冷却至45～50℃的胰酪大豆胨琼脂培养基，同时取金黄色葡萄球菌菌悬液1ml，接种于另外2个平皿中，倾注同样的培养基，摇匀，凝固后，倒置培养，在（30～35）℃培养24～48小时。

胰酪大豆胨肉汤培养基：分别取上述三种对照菌悬液1ml，接种于2支胰酪大豆胨肉汤培养基中，同时取金黄色葡萄球菌菌悬液1ml，接种于另外2支胰酪大豆胨肉汤培养基中，在（30～35）℃培养18～24小时。

结果观察

胰酪大豆胨琼脂培养基：观察平板上各菌株菌落的生长情况，计数菌落数，并记录菌落形态、大小、颜色、边缘等特征。

胰酪大豆胨肉汤培养基：观察培养液的浑浊程度，判断细菌生长情况。

结果判断

胰酪大豆胨琼脂培养基：若接种金黄色葡萄球菌的平板上生长的菌落数不低于150CFU，接种三种对照菌的平板上生长的菌落数与接种金黄色葡萄球菌的平板上生长的菌落数相比，不低于70%，且菌落形态符合相应菌株特征，则判该培养基对金黄色葡萄球菌有良好的促生长能力。