高级抗生素抗性菌株的筛选方法教学课件.pptVIP

高级抗生素抗性菌株的筛选方法;课程简介：抗生素耐药性现状;耐药性产生的机制回顾;高级抗生素的定义与分类;筛选方法概述：策略与目标;一级筛选：初步筛选高耐药性菌株;培养基优化：提高筛选效率;筛选策略：直接vs间接筛选;梯度稀释法：原理与应用;抗生素浓度梯度设置的技巧;选择性培养基的设计与应用;实例分析：万古霉素耐药菌株筛选;二级筛选：确认与验证耐药性;药敏试验：纸片扩散法;药敏试验：微量肉汤稀释法;最小抑菌浓度（MIC）的测定;耐药机制初步推断;三级筛选：分子生物学验证;PCR扩增：耐药基因检测;基因测序：确定耐药基因突变;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）：基因表达分析;Southernblotting：基因拷贝数分析;四级筛选：表型与基因型关联;质粒提取与转化：验证基因功能;基因敲除/敲入技术：CRISPR-Cas9;构建耐药基因敲除株;观察表型变化;五级筛选：全基因组测序（WGS）;WGS流程：样品准备与测序;生物信息学分析：基因组组装;耐药基因组注释;新型耐药基因的发现;比较基因组学：耐药性进化分析;耐药性转移机制研究;接合转移实验：原理与操作;转导实验：噬菌体介导的基因转移;自然转化实验：DNA摄取;耐药性转移的分子机制研究;筛选结果的质量控制;假阳性与假阴性结果分析;重复实验验证;数据统计分析;实验记录与报告撰写规范;安全注意事项;生物安全等级评估;实验室防护措施