DB37T 3673-2019 牡蛎疱疹病毒1型检测技术规范 巢式PCR法.docxVIP

ICS11.220B41

DB37

山东省地方标准DB37/T3673—2019

牡蛎疱疹病毒?型检测技术规范巢式PCR

法

Ostreidherpesvirus-1DetectionSpecification-NestedPCR

2019-08-30发布2019-09-30实施

山东省市场监督管理局发布

I

DB37/T3673—2019

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和缩略语 1

3.1术语和定义 1

3.2缩略语 1

4试剂及仪器 1

4.1试剂 2

4.2仪器 2

5采样 3

5.1采样对象 3

5.2采样数量、方法和保存运输 3

5.3样品的采集 3

6检测 3

6.1DNA的提取 3

6.2巢式PCR操作步骤 3

6.3电泳及测序 4

7结果 4

7.1结果判定 4

7.2结果表述 4

附录A（规范性附录）试剂及配制方法 5

附录B（资料性附录）检测目的片段的DNA序列及电泳图 7

II

DB37/T3673—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由山东省农业农村厅提出并监督实施。

本标准由山东省渔业标准化技术委员会(鲁TC03)归口。

本标准起草单位：山东农业大学、济宁滨阳生物科技股份有限公司、泰安益海生物科技有限公司、泰安智博生物科技有限公司、南京根洋生物科技有限公司、南京少伯生物科技有限公司、南京福海生物科技有限公司。

本标准起草人：王雪鹏、丁雷、闫现广、王方鹏、郭志明、孙永灿、付天增、姜衡、黄金菁。

1

DB37/T3673—2019

牡蛎疱疹病毒?型检测技术规范巢式PCR法

1范围

本标准规定了牡蛎疱疹病毒?型（Ostreidherpesvirus-1，OsHV-1）的巢式PCR检测方法，适用于对贝类样品进行疱疹病毒?型带毒情况的定性检测，以进行牡蛎疱疹病毒?型的流行病学调查、诊断、检疫和监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T7205.1牡蛎包纳米虫病诊断规程

3术语和缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1.1

牡蛎疱疹病毒?型

牡蛎疱疹病毒?型属于软体动物疱疹病毒科（Malacoherpesviridae）、牡蛎疱疹病毒属（Ostreavirus），是一种双链DNA病毒，在世界范围内广泛流行，主要危害牡蛎、扇贝和魁蚶等多种双壳贝类，对贝类养殖业造成重大的损害。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。bp：碱基对（basepair）

dNTPs：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）EB：溴化乙啶（ethidiumbromide）

EDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）Taq：水生栖热菌（thermusaquaticus）

TE：Tris盐酸和EDTA缓冲液（EDTATris·HCl）

Tris：三羟甲基氨基甲烷（trishydroxymethylaminomethane）

4试剂及仪器

2

DB37/T3673—2019

4.1试剂

4.1.1除非另有说明，实验用水均为GB/T6682规定的三级水或相当纯度的水。

4.1.2无水乙醇：分析纯。

4.1.3TE缓冲液按附录A.1的规定。

4.1.4抽提缓冲液按附录A.2的规定。

4.1.5蛋白酶K按附录A.3的规定。

4.1.610mol/L乙酸铵按附录A.4的规定。

4.1.7Tirs饱和酚（pH≥7.