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ICS65.020.20
B44
DB33
浙江省地方标准
DB33/T2246—2020
猪流行性乙型脑炎病毒荧光定量RT
－PCR检测方法
Real-timePCRdetectiontechniqueforJapaneseencephalitisvirus
2020-03-03发布2020-04-03实施
浙江省市场监督管理局发布
DB33/T2246—2020
前言
本标准按照GB/T1.1-2009的规定编写。
本标准由浙江省农业农村厅提出。
本标准由浙江省畜牧兽医和饲料标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：浙江省动物疫病预防控制中心。
本标准主要起草人：谢荣辉、张传亮、吴赟竑、徐辉、刘霞、周蕾、柴娟、虞一聪、王雅婷、周彩
琴、赵灵燕、刘爱军、吴雪军。
I
DB33/T2246—2020
猪流行性乙型脑炎病毒荧光定量RT－PCR检测方法
1范围
本标准规定了猪流行性乙型脑炎病毒（Japaneseencephalitisvirus，JEV）荧光定量RT－PCR检
测的实验条件、操作步骤和结果判定等要求。
本标准适用于猪流行性乙型脑炎病毒核酸的检测。
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1
猪流行性乙型脑炎
由猪流行性乙型脑炎病毒引起的一种急性传染病。猪的主要临床症状表现为高热、流产、死胎和公
猪睾丸炎。
3实验条件
3.1仪器
3.1.1高速冷冻离心机。
3.1.2荧光定量PCR仪。
3.1.3生物安全柜。
3.1.4组织研磨仪。
3.1.5微量移液器。
3.1.6冰箱。
3.1.7涡旋混匀器。
3.1.8高压灭菌器。
3.2试剂
除特别说明外，本标准所用试剂均为分析纯，所有试剂均用无RNA酶污染的容器分装。
3.2.1Trizol：核糖核酸（Ribonucleicacid,RNA）提取试剂。
3.2.2氯仿：4℃预冷。
3.2.3异丙醇：4℃预冷。
3.2.4焦炭酸二乙酯（Diethylpyrocarbonate,DEPC）水：取DEPC100μL，加超纯水至100mL，室
温过夜，121℃高压灭菌15min，分装，冻存备用。
3.2.575%乙醇：用75mL无水乙醇，加DEPC水至100mL，混匀，－20℃预冷。
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DB33/T2246—2020
3.2.6商品化的一步法实时荧光RT-PCR反应试剂：OneStepPrimeScript™RT-PCRKit（PerfectReal
Time，TAKARA)，含有2×OneStepRT-PCRBufferⅢ、ExTaqHS（5U/µL）、PrimeScriptRTEnzyme
MixⅡ和无RNA酶的水。
3.2.70.01mol/LPH7.4磷酸
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