微生物限度检验.pptxVIP

1微生物限度检验方法验证2007.4

2微生物限度检查

(MicrobialLimitsTest)：是指非无菌制剂及原，辅料受到微生物污染程度的检查。包括：细菌计数；霉菌及酵母菌计数；控制菌检查：大肠杆菌，沙门菌，铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌，大肠菌群

3细菌、霉菌及酵母菌计数样品10g或10ml+90ml缓冲液总需氧菌TSA,35℃,48-72h真菌SDA(PDA),20-25℃,5-7d结果(cfu/ml)取1ml样品

4控制菌检查(EP)肠杆菌和G-杆大肠杆菌沙门菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌梭菌10g(10ml)样品10g(10ml)样品10g(10ml)样品10g(10ml)样品10g(10ml)样品10g(10ml)样品90ml乳糖肉汤35-37℃,2-5h90mlTSB35-37℃,18-48h90mlTSB35-37℃,18-24h90ml缓冲蛋白胨水90ml缓冲蛋白胨水100ml增强梭菌培养基35-37℃,48h,厌氧10ml加入100mlMossel肉汤(EE肉汤)35-37℃,18-48h1ml加入100mlMcConkey肉汤43-45℃,18-24h1ml加入10mlTTB肉汤41-43℃,18-24h10ml加入100mlTSB35-37℃,18-48h10ml加入100mlTSB35-37℃,18-48h含庆大霉素的哥伦比亚琼脂35-37℃,48h,厌氧VRBG琼脂35-37℃,18-24hMacConkey琼脂35-37℃,18-72h脱氧胆盐琼脂XLD琼脂亮绿(BG)琼脂35-37℃,18-72hCetrimide琼脂35-37℃,18-72hBairdParker琼脂35-37℃,18-72h哥伦比亚琼脂35-37℃,48h,厌氧和需氧计数产气荚膜梭菌

5控制菌检查(USP)沙门菌大肠杆菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌10g或10ml样品10g或10ml样品10g或10ml样品10g或10ml样品90ml乳糖肉汤90mlTAT肉汤基础90ml乳糖肉汤90mlTAT肉汤基础90mlTSB90mlTAT肉汤基础90mlTSB90mlTAT肉汤基础1ml加入10ml1)SC肉汤2)TTB肉汤BS琼脂XLD琼脂亮绿(BG)琼脂MacConkey琼脂EMB琼脂Cetrimide琼脂假单胞菌分离琼脂BairdParker琼脂VJ琼脂甘露醇盐琼脂

6控制菌的检测(中国药典05版)大肠杆菌大肠菌群沙门菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌梭菌1g(1ml)样品1g(1ml)样品10g(10ml)样品1g(1ml)样品1g(1ml)样品1g(1ml)样品X2100ml胆盐乳糖培养基35-37℃,18-24h3X10ml胆盐乳糖发酵管35-37℃,18-24h200ml营养肉汤35-37℃,18-24h100ml胆盐乳糖培养基35-37℃,18-24h100ml亚碲酸钾肉汤(或营养肉汤)35-37℃,18-24h(其中一份样品80℃,10分钟)100ml新鲜庖肉培养基厌氧,35-37℃,72-96h0.2ml加入5mlMUG培养基35-37℃,4h24hMacConkey琼脂或EMB平板35-37℃,18-24h1ml加入10mlTTB肉汤41-43℃,18-24hMacConkey琼脂(或EMB平板)35-37℃,18-24h4-5个可疑菌落10ml乳糖发酵管35-37℃,18-24h胆盐硫乳琼脂DHL(或SS琼脂)MacConkey琼脂(或EMB平板)35-37℃,18-24h溴化十六烷基三甲铵Cetrimide琼脂35-37℃,18-72h甘露醇氯化钠琼脂(或卵黄氯化钠琼脂)35-37℃,18-72h0.2ml涂抹于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂厌氧,35-37℃,48-72h

705版微生物限度检查法与英美比较比较项目ChP2005USP29BP2002检验条件规定总体10000级、局部100级无具体规定无具体规定计数测定方法平皿法、薄膜过滤法、MPN平皿法、薄膜过滤法,MPN平皿法、薄膜过滤法、MPN控制大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌(10)、铜绿假单胞菌、金葡球菌、梭菌、其他致病菌大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、金葡球菌、大肠菌群、肠道菌、肠杆菌科大肠埃希菌、沙门菌(10)、铜绿假单胞菌、金葡球菌；肠杆菌科及某些革兰阴性菌稀释液pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液；pH6.8/7.6PBS；0.9%NaClpH7.2PBS；大豆酪蛋白消化培养基/乳糖肉汤培养基pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液；