DB51T 1082-2010 饲料中伏马毒素B1的测定 高效液相色谱法.docxVIP

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备案号：28172-2010DB51

四川省地方标准

DB51/T1082—2010

饲料中伏马毒素B?的测定高效液相色谱法

DeterminationoffumonisinB?infeeds

High-performanceliquidchromatography

2010-06-01发布2010-07-01实施

四川省质量技术监督局发布

DB51/T1082-2010

目次

前言 Ⅱ

1范围 1

2规范性引用文件 1

3原理 1

4试剂和溶液 1

5仪器与设备 2

6试样制备 2

7分析步骤 2

8结果计算 3

9精密度 3

附录A 4

I

Ⅱ

DB51/T1082-2010

前言

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准由四川省饲料工作总站负责起草。

本标准起草人：柏凡、李云、魏敏、王宇萍、赵立军、张静。

1

DB51/T1082-2010

饲料中伏马毒素B?的测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了测定饲料中伏马毒素B?的含量的高效液相色谱法(HPLC)。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定。

本标准中伏马毒素B?的检出限为0.2mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

试样经甲醇-水提取，离心、过滤后，取滤液经过免疫亲和柱净化，经衍生化，用高效液相色谱仪-荧光检测器检测，外标法计算伏马毒素B1的含量。

4试剂和溶液

除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T6682一级用水的规定。

4.1甲醇：色谱纯。

4.2乙腈：色谱纯。

4.3乙酸：优级纯。

4.4磷酸：优级纯。

4.5盐酸。

4.6氯化钠。

4.7氯化钾。

4.8磷酸钠。

4.9磷酸二氢钠。4.10磷酸氢二钠。

4.11磷酸二氢钾。4.12氢氧化钠。

4.13四硼酸钠：优级纯。4.14巯基乙醇：优级纯。4.15邻苯二甲醛：优级纯。

4.16提取液：甲醇+水=80+20(体积比)。

4.17衍生剂：称取5mg邻苯二甲醛，溶于1mL甲醇，用0.05mol/L四硼酸钠溶液定容到50mL,加入25μL巯基乙醇，混匀，备用(4℃可保存一周)。

4.18磷酸盐缓冲液(PBS):称取8.0g氯化钠、1.44g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，溶于1000mL水，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至7.0。

2

DB51/T1082-2010

4.19伏马毒素B?标准品：含量大于98%。

4.19.1标准贮备液：精密称取10mg伏马毒素B1标准品，用乙腈+水(1+1)溶解、定容至100mL,此贮备液浓度为100μg/mL,置于2～8℃冰箱中保存，有效期6个月。

4.19.2标准工作溶液：分别准确移取伏马毒素B?贮备液，用流动相配制成标准工作溶液：0.2μg/mL,1.0μg/mL,5.0μg/mL,25μg/mL,50μg/mL。置于2～8℃冰箱中保存，有效期6个月。

注意：

注1:凡接触伏马毒素B的容器，需浸入4%次氯酸钠(NaOC1)溶液，放置半天后清洗备用。

注2:为了安全，分析人员操作时须带上医用乳胶手套，在通风橱内操作。

4.19.3伏马毒素免疫亲和柱。

5仪器与设备

5.1分析天平：感量0.1mg。

5.2超声波清洗器。

5.3离心机：转速为5000r/min以上。

5.4超纯水处理器。

5.5涡旋混合器。

5.6高效液相色谱仪：配备荧光检测器。

5.7氮吹仪。

5.80.45μm滤膜。

6试样制备

按GB/T14699.1规定采集试样后，按GB/T20195规定，选取具有代表性的实验室样品1kg,四分法缩减分取200g左右，