高中生物高考专题13-基因工程(原卷版).pdfVIP

2020届高考生物难点及易错题精讲精练

专题13基因工程

【难点精讲】

一、限制酶的选择

例题：2（016全国卷川，40）图a（）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRi、BamHI

和3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图b（）为某种表达载体的示意图（载

体上的EcoRI、SM3AI的切点是唯一的）。

—GAATTC————GGATCC——GATC—

——CTTAAG——一CCTAGG——CTAG

图a（）

复制原点

抗生素抗性基闪

图b（）

根据基因工程的有关知识，回答下列问题:

（1）经I酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被酶切后的产物连接,

理由是

2（）若某人利用图b（）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组DNA

分子，如图c（）所示，这三种重组DNA分子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的

有，不能表达的原因是

图c（）

3（）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的陋，常见的有和，其

中既能连接黏性末端又能连接平末端的是

【难点突破】

(1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类

①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，以便将目的基因“切出”，如图甲可选择Ps/I。

②不能选择切点位于Fl的基因内部的限制酶，以防破坏目的基因，如图甲不能选择S/MI。

③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质

粒，如图甲也可选择用Pst\和EcoRI两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点),

而且这种切点不致于破坏所有的“标记基因以及启动子和终止子。

(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类

①所选限制的要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。

②质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制防尽量不耍破坏这些结构，应至少

含有一个完好的标记基因，如图乙中限制的ps/I因其会破坏标记基因而不宜选择。

③所选限制酶切点不应位于复制原点处以防破坏复制原点，如果所选酶的切点不止•个，则

切割重组后可能会丢失某些片段，若丢失的片段含复制原点区，则切割重组后的片段进入受

体细胞后不能自主复制。

④所选限制酶，其切点应位于启动子与终止子之间，如图乙中小〃dHI会破坏启动子，EcoR

I会破坏终止子，而Nde1和BamHI切出的切口可让目的基因嵌入启动子与终止子之间。

3（）参考Ti质粒的T-DNA片段选择限制酶

若质粒上标出T—DNA片段，则所选限制酶切点应位于T—DNA片段中，从而有利于

将目的基因嵌入到T-DNA片段上——因为Ti质粒的T-DNA片段最易转移至受体细胞并

旦整合到受体细胞染色体DNA上，如用两种限制酶X儿1和Sac1（两种酶切出的黏性

末端不同）切割某DNA,获得含目的基因的片段。若利用该片段构建基因表达载体,则下

图中甲、乙、丁，Ti质粒均不