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课题2温度对酶活性的影响

课题概述：

生物体内的各项代谢，只有在酶的参与下才能迅速进行。酶的本质是蛋白质，其催化作用受温度等条件的影响。不同类酶均有其作用的最适温度，高于或低于该温度，酶的活性就会下降，直至完全遭到破坏。

过氧化氢酶双氧水对大多数生物体有害，而许多生物体内都有过氧化氢酶等来分解它。

过氧化氢酶

H2O2—————→H2O+O2

本实验将以酵母菌为过氧化氢酶来源，利用氧气浓度传感器来测定不同温度下该反应的速度，从而确定过氧化氢酶发挥作用的最适温度。

氧气浓度传感器可测定气体中0-27%范围的氧气的浓度。其核心装置是一原电池，氧气分子进入其中被还原而引起电流变化，即氧气浓度决定了电流变化的大小，进而改变输出电压的大小。因此通过对输出电压的测定即可确定气体中氧气的浓度。

目的：

1．学会氧气浓度传感器的使用方法。

2．学会测定不同温度下酶促反应的速率，并对各速率进行比较。

器材：

实验材料：市售干酵母。

实验仪器及用品：TI—83Plus图形计算器及CBL系统、氧气浓度传感器(附配套塑料瓶)、玻璃棒、温度计、100mL小烧杯、50mL量筒、小试管、刻度移液管、胶头滴管、保温杯、蒸馏水洗瓶、冰、冷水、热水、吸水纸。

实验试剂：3%H2O2溶液、2%葡萄糖。

步骤：

实验准备

1．水浴准备：保温杯(或两个烧杯间填充泡沫塑料代替之)中盛放一定量冰水或热水，分别调至0—5℃、20—25℃、30—35℃、35—40℃。实验期间温度计始终要悬在水中，监测温度。如有变化，及时调整。

2．称取0.5g干酵母溶解在25mL2%葡萄糖溶液中，搅拌均匀。取4支小试管，各加入1mL上述悬浊液，分别置于各温度水浴中5—10分钟。

二．设置传感器

1．连接TI—83Plus图形计算器、CBL系统。

2．将氧气浓度传感器与CBL系统CH1通道相连。

3．打开TI—83Plus图形计算器、CBL系统，按APPS，选择“CHEMBIO”程序，按ENTER。(见图1、2)

图1图2

4．在“MAINMENU”菜单中选择“1：SETUPPROBES”；输入传感器数量“1”，按ENTER。(见图3)

5．在“SELECTPROBE”菜单中选择选择“7：MOREPROBES”，直至出现氧气浓度传感器。

6．在“SELECTPROBE”菜单中选择“4：OXYGENSENSOR”。(见图4)

图3图4

7．输入通道序号“1”；在“CALIBRATION”菜单中选择“1：USESTORE”。(见图5、6)

图5图6

8．在“OXYGENUNITS”菜单中选择“1：PERCENT”。传感器设置完成后即返回“MAINMENU”菜单。(见图7、8)

2．在主界面中按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜单中选择“2：L2”；按STO?；按ALPHA+[B]，按ENTER。此操作将L2数组中的数据存储到B数组中。(见图20、21)

图20图21

六．继续数据采集。

1．按APPS，选择“CHEMBIO”程序，按ENTER。

2．重复三、四、五的操作步骤，可以依次测定30-35℃、20-25℃、0-5℃下过氧化氢酶催化反应的速率。

实验结果及数据处理：

1．按ENTER，在“MAINMENU”菜单中选择“7：QUIT”。

2．在主界面中按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜单中选择“A”；按STO?；按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜单中选择“1：L1”，按ENTER。此操作将A数组中的数据复制到L1数组中。(见图22)

3．在主界面中按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜单中选择“B”；按STO?；按2nd+[LIST]，在“NAMES”菜单中选择“2：L2”，按ENTER。此