DB34_T2996-2017_猪链球菌检验操作规程_安徽省.docxVIP

ICS11.220

DB34

B41

安徽省地方标准

DB34/T2996—2017

猪链球菌检验操作规程

ProtocolofexaminationforStreptococcussuis

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2996—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、合肥市动物疫病预防控制中心、东至县

畜牧兽医局。

本标准主要起草人：李郁、孙裴、高亚飞、黄晓慧、何宗来、吴华健、魏建忠、王希春、郑新勇、

钱昌银。

I

DB34/T2996—2017

猪链球菌检验操作规程

1范围

本标准规定了猪链球菌检验的设备和材料、检验程序、操作步骤、结果报告、废弃物无害化处理与

人员安全防护。

本标准适用于猪链球菌的检验。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

GB19489实验室生物安全通用要求

SN/T2025动物检疫实验室生物安全操作规范

SN/T2984检验检疫动物病原微生物实验活动生物安全要求细则

3.1显微镜：物镜10倍～100倍。

3.6pH计、pH比色管或精密pH试纸。

3.7饱和氯化钠溶液：见附录A中A.1。

1

DB34/T2996—2017

4检验程序

猪链球菌检验程序见图1。

5操作步骤

5.1采样、运输和保存

对病猪，最急性和急性病例可无菌采集死亡猪的心、肝、肺、肾、脾、淋巴结等组织，慢性病

例如关节炎型一般采取关节液及周围组织；对活猪，可采取扁桃体拭子、鼻腔拭子。

5.1.2脏器组织样品采集后需延迟送检的，可保存于饱和氯化钠溶液或30％甘油缓冲盐水溶液中，保

存时间不超过72h。

5.1.3样品均需采取低温（4～8℃）保存和运输。

5.2.1采集的样品制成触片，革兰氏染色，镜检。

5.2.2猪链球菌形态学特征：革兰氏阳性球菌，菌体直径约1m，链状排列，链长短不一，链的长短

常与细菌的种类及生长环境有关，固体培养物以双球菌为多，少量呈3个～5个排列的短链，液体培

养物以链状为主，无芽孢，能形成荚膜。

划线接种于血液琼脂平板，36℃±1℃培养24h±2h，如菌落生长缓慢，可延长至48h±2h，

使之形成单个菌落，以供鉴定用。

2

DB34/T2996—2017

5.3.2病料的分离和触片检查

用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织后划线接种于血液琼脂平板，于36℃±1℃培养

24h±2h，如菌落生长缓慢，可延长至48h±2h后观察。同时取病料做组织触片，姬姆萨染色后镜

检，如见球菌则表明病料中可能含有链球菌。

5.3.3扁挑体和鼻腔拭子的分离

扁桃体和鼻腔拭子样品加入到含有5mL灭菌选择性THB增菌液的试管中，于36℃±1℃培养24

h±2h后，划线接种于选择性普通琼脂绵羊血平板。

5.3.4动物产品的均质、增菌和分离

以无菌操作取检样25g，加入装有225mL灭菌选择性THB增菌液的广口瓶内，均质，于36℃±1℃

培养24h±2h后，划线接种于选择性普通琼脂绵羊血平板。

5.3.5在血液琼脂平板和选择性普通琼脂绵羊血平板上菌落特征

圆形、微凸、表面光滑、湿润、边缘整齐、半透明的菌落，直径约0.3～1.0mm。

5.4生化反应试验

经初步鉴定后，做5％乳搪、海藻糖、七叶苷、甘露醇、山梨醇、马尿酸钠等糖发酵试验。猪链球

菌发酵5％乳糖和海藻糖产酸，发酵七叶苷，不发酵甘露醇和山梨醇，不水解马尿酸钠。

或应用全自动细菌鉴定系统进行生化反应试验。

5.5.1猪链球菌对小鼠、斑马鱼最敏感，均有致病力。

5.5.2小鼠模型：将肺、脑、脾、肝、淋巴结磨碎，用灭菌生理盐水制成1:5组织悬液，或将24h

的肉汤纯培养物用于动物试验。小鼠皮下注射组织悬液0.2mL或纯培养菌液0.1mL，接种后小鼠出

现精神萎顿、拱背、毛乱、停食，3d～7d死亡；死亡的小鼠脾脏肿大，肺脏和肝脏出血。以死亡小

鼠内脏组织制成触片，革兰氏染色，镜检，可见猪链球菌；同时在血液琼脂平板或选择性普通琼脂绵羊

血平板上作分离培养，可见猪链