植物遗传转化方法和技术.pptVIP

新霉素抗性基因是从大肠杆菌转座子Tn5中分离的，其对应失活的选择试剂为卡那霉素、新霉素和G418。对茄科植物（烟草、马铃薯、番茄）转化特别有效，对豆科和单子叶植物效果不佳。A、新霉素磷酸转移酶基因（Npt-II）第30页，共57页，星期日，2025年，2月5日B、庆大霉素抗性基因（gent）该基因编码一种乙酰转移酶，属抗生素标记基因，它通过对庆大霉素的乙酰化而使其失活。该选择系统目前也有一定的应用，例如矮牛、烟草和番茄。第31页，共57页，星期日，2025年，2月5日潮霉素是一种很强的细胞抑制剂，对许多植物都有很强的毒性。潮霉素磷酸转移酶可通过对潮霉素磷酸化而使其失活。C、潮霉素磷酸转移酶基因（hpt）第32页，共57页，星期日，2025年，2月5日D、膦丝菌素乙酰转移酶基因（bar）该基因是从吸水链霉菌中克隆的一种基因，其对应的选择试剂为膦丝菌素（basta），膦丝菌素可抑制谷氨酰胺合成酶的活性，从而导致非转化细胞发生氨的致死性累积。第33页，共57页，星期日，2025年，2月5日（三）农杆菌介导法的基本流程第34页，共57页，星期日，2025年，2月5日大豆子叶节法为例：大豆子叶节器官发生系统的优化大豆农杆菌转化系统的优化第35页，共57页，星期日，2025年，2月5日大豆无菌苗的获得外植体的制备（类型、生理状态）高分化率基因型的选择丛生芽诱导培养基的确定丛生芽伸长培养基的确定生根培养基的确定移栽大豆子叶节器官发生系统的优化第36页，共57页，星期日，2025年，2月5日第37页，共57页，星期日，2025年，2月5日选择压的确定农杆菌侵染液的制备外植体苗龄预培养（时间）农杆菌的侵染（浓度、时间）共培养（时间）选择培养抗性芽的伸长生根培养农杆菌转化系统的优化第38页，共57页，星期日，2025年，2月5日F1.共培养2.在选择培养基上筛选3.筛选获得的抗性愈伤5.胚萌发成苗6.转基因植株移栽大田4.抗性愈伤分化成胚状体棉花第39页，共57页，星期日，2025年，2月5日(a)Embryogeniccalligeneratedfromthescutellaofmatureseeds.ArrowheadsshowactivelygrowingcalliappropriateforAgrobacteriuminoculation.(b)InoculationofcalliwithA.tumefaciens.(c)Proliferationofhygromycin-resistantcallionN6D-Smedium3weeksaftertransfer.Leftcalliareresistanttohygromycinandrightcalliaresensitive.(d)ShootregenerationfromcalliresistanttohygromycinonMS-NKmedium3weeksaftertransfer.(e)Rootingandgrowthoftransgenicriceplants.第40页，共57页，星期日，2025年，2月5日二、基因枪法（微弹轰击法）1、工作原理：将外源DNA包被在微小的金粒或钨粒表面，然后在高压的作用下将微粒高速射入受体细胞或组织，微粒上的外源DNA进入细胞后，整合到植物染色体上并得到表达，从而实现外源基因的转化。第41页，共57页，星期日，2025年，2月5日第1页，共57页，星期日，2025年，2月5日植物基因工程是近20年来随着DNA重组技术、植物遗传转化技术及植物组织培养技术而发展起来的现代生物技术。通过植物基因工程获得转基因植物，在农业生产发展及植物分子生物学研究中有十分重要的意义。目前，已获得很多有重大经济价值的转基因植物。第2页，共57页，星期日，2025年，2月5日基因工程的基本步骤目的基因的获取基因载体的选择与构建目的基因与载体的拼接重组子导入受体分子外源基因的表达和产物的分离重组子的检测第3页，共57页，星期日，2025年，2月5日第4页，共57页，星期日，2025年，2月5日本节主要内容根癌农杆菌介导法基因枪介导法其它转化方法第一节植物遗传转化方法第5页，共57页，星期日，2025年，2月5日常用的植物转基因方法：到目前为止,已确立了11种植物转基因方法。根据其转化原理，可分为三大类，即利用载体的转化系统，不用任何载