布鲁氏菌试管凝集试验.pptVIP

诊断标准没有进行过菌苗接种的人、畜血清试验的标准是：人、牛、马、鹿、骆驼等大家畜血清为1：100(++)及以上者为阳性，1：50(++)为可疑。猪、羊(绵羊、山羊)、犬等小家畜血清在1：50(++)及以上者为阳性，1：25(++)为可疑。对可疑反应的人和动物应在10-25天内重复检查，以便进一步确定诊断。第23页，共35页，星期日，2025年，2月5日影响试验结果的因素及注意事项

受检血清应新鲜、无溶血、无污染，存放血清处温度不能超过10℃，采血后应于3—4日内进行检查，因放置时间过长可能会导致血清效价降低。遵守操作规程：所用的器材要清洁、干燥，试剂的加量一定要正确，放入温箱的温度和时间都要按要求，否则都影响结果。每份血清和抗原均要有对照。高渗盐水作凝集反应，一般浓度在10~12%，一般切记人血清不能用高渗盐水。第24页，共35页，星期日，2025年，2月5日作凝集反应时，有个别血清会出现前带现象，即稀释度低的血清管内(或血清量多的格)不发生凝集，而稀释度高的管内(或血清量少的格)出现凝集，这叫做前带现象。如果某血清在平板凝集反应中出现了前带现象，那么做试管反应时应多做几个管，多采用几个稀释度。氯化钠的含量增高对血清反应有明显的影响，盐的浓度越高，反应的敏感性提高，因此在兽医界为了克服凝集反应中的阻抑抗体的干扰，对羊血清采用高渗盐水作凝集反应，一般浓度在10~12%，切记一般人血清不能用高渗盐水。第25页，共35页，星期日，2025年，2月5日关于布鲁氏菌试管凝集试验第1页，共35页，星期日，2025年，2月5日

免疫学基础

第2页，共35页，星期日，2025年，2月5日由于布鲁氏菌培养的营养条件苛刻而且时间长，所以布鲁氏菌的血清学诊断越来越受到重视。第3页，共35页，星期日，2025年，2月5日主要是根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应的原理,用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原).由于试验时通常是用患者血清作为待检材料,所以检测抗原抗体的体外试验又称为血清学试验或血清学反应.第4页，共35页，星期日，2025年，2月5日血清学检查既可协助早期诊断，还可确定是否复发或重复感染。感染1-2周后，患者血清中出现IgM抗体，可以用凝集试验或抗人球蛋白试验检测．感染３周后，患者血清中出现IgG抗体，可以用补体结合试验，荧光抗体或ELISA检测．第5页，共35页，星期日，2025年，2月5日虎红平板的凝集反应（RBPT）第6页，共35页，星期日，2025年，2月5日原理该试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。由于所用的抗原是酸性（PH3.6—3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。第7页，共35页，星期日，2025年，2月5日器材与试剂虎红平板凝集抗原、被检血清、清洁脱脂玻片或有凹形孔的玻片、0.1ml吸管或微量加样器、混合棒或牙签第8页，共35页，星期日，2025年，2月5日试验方法在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03ml，充分混匀，在5分钟内观察结果。第9页，共35页，星期日，2025年，2月5日(四)结果判定有二种方法，第一种是，出现可见的凝集反应就判为阳性；另一种用“+”表示凝集程度按下列标准用加号记录反应强度：++++：出现大的凝聚片或小的粒状物，液体完全透明，100%凝集+++：有明显的凝聚片，液体几乎完全透明，75%凝集++：有可见的凝集片，液体不甚透明，50%凝集+：液体混浊，只有少量粒状物，25%凝集-：液体均匀混浊第10页，共35页，星期日，2025年，2月5日评价此法简便、快速、容易操作，适于基层大面积检疫；此法有一定敏感性，检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。因为在酸性环境下IgM活性受抑，该法主要是检查IgG类凝集抗体，所以特异性较好，与补体结合试验、二巯基乙醇（2-ME）试验和抗球蛋白（Coomb’s0）试验有较高的吻合率。该法受制备抗原时条件影响较大，所以每批制备抗原应予以检查、标化方可应用。第11页，共35页，星期日，2025年，2月5日第12页，共35页，星期日，2025年，2月5日

试管凝集试验第13页，共35页，星期日，2025年，2月5日试管凝集试验的原理

1897年莱特氏等(Wright)与其同事发现患该病的病人血清与马尔他细菌的培养物产生了凝集现象，遂称之为莱特氏凝集反应，成