《卫生化学》高效液相色谱法.pptx

高效液相色谱法;;发展

高效液相色谱法

(highperformanceliquidchromatography,HPLC)

是60年代末在经典液相色谱法的基础上，应用在气相色谱实践中发展起来的色谱理论，建立并发展起来的一种新型分离分析技术。;发展

在经典液相色谱中，由于使用粗颗粒的固定相，填充不均匀，使分离的柱效低；依靠重力使流动相流动，使分析速度慢，且自动化程度低。

60年代，Giddings等人将气相色谱中的塔板理论和速率理论应用于液相色谱领域。按照速率理论，要减少涡流扩散对柱效的影响，应使固定相的颗粒细，大小均匀，并且填充均匀。所以，通过改进固定相性质，并进而改变流动相的输送方式，就产生了HPLC。;特点

HPLC具有柱效高、分离速度快、分离效果好、检测灵敏度高、自动化程度高等特点。;特点

①HPLC首先使用了细颗粒(5~10μm，而经典液相色谱法为150~220μm)，高效率的固定相和均匀填充技术，从而使HPLC具备了新型高效的色谱分离柱，柱效可高达每米105理论塔板。;特点

②HPLC采用了高压泵输送流动相。由于HPLC采用了细颗粒的固定相，使传统的依靠重力输液的方法彻底不可行，HPLC法中采用了高压泵输送流动相，使分离速度大大提高，并可利用多泵，达到迅速改变流动相组成成分，使分离速度快，分离效果好。;特点

③HPLC采用了高灵敏的检测器，将检测器接在柱后直接检测洗脱的各组分，根据组分的特性可采用紫外、荧光、电化学等不同检测器，最小检测量可达10-9~10-11g。;特点

④HPLC仪器采用了先进的计算机技术，使HPLC整个系统的运用，操作都受计算机控制(色谱工作站)，仪器可自动控制色谱条件，自动进样，自动处理数据、绘图和打印结果，成为全自动的仪器。;应用

在分析对象上，HPLC与GC有较大差别：

GC的分析对象是在柱温下具有足够挥发度而且热稳定性好的物质，因此，GC限于气体分析和沸点较低物质的测定，对于分子量较大(挥发性差)，或热分解型物质，一般就不能用GC法分离分析。

而HPLC具有应用范围更广的优点，对于不能用GC分离分析的高沸点、相对分子质量大、热稳定性差的有机化合物及多种离子，都可用HPLC进行分离分析。;应用

HPLC可利用被分离组分极性的差别，或大小的差别，或离子交换能力的差别，或生物分子间亲和力的差别进行分离。

HPLC可用多种溶剂作流动相，所以可通过改变流动相组成来改善分离效果(而GC的流动相为载气，不可随意改变其组成来改善分离)。

因此HPLC对于性质和结构相似的物质分离的可能性比GC更大。

此外，HPLC的馏分容易收集，所以HPLC除了用于分离分析外，还可用于分离制备。;应用

HPLC在医药领域中主要用于药物的主成分含量测定，杂质、分解产物和微量成分的测定。既用于对产品质量的检测，也用于药物研究开发，还用于药物代谢产物的分析、鉴定及临床治疗药物的监测。

HPLC在临床医学研究中也有较大应用。例如对蛋白质、多肽、酶、激素等的分析和研究。

HPLC在卫生、食品、环境等领域中应用也十分广泛，例如，各种维生素可用HPLC同时检测，环境中的多环芳烃等可用HPLC检测。;

广泛的应用领域---食品及农业/质检/

医药/生命科学/石化……

;综上所述，HPLC是一种高效、快速的分离分析技术，具有灵敏度高、选择性好、自动化程度高的特点。

HPLC的应用范围广，可分析的样品占有机物总数的75～80％，在生物化学、食品分析、临床检验、药物生产和研究、环境保护、化学化工等领域广泛应用。;不足之处：HPLC与GC相比，

缺乏通用型的高灵敏度检测器(目前常用的灵敏度较高的紫外、荧光检测器都是选择性检测器)；

仪器比较复杂、昂贵；柱和流动相的消耗成本高；

溶剂对环境和操作人员有影响。

所以，对于既能用GC也能用HPLC测定的物质，一般还是用GC法更适当些。;分类

HPLC根据分离机理和采用固定相的不同，可分成不同类型，主要有如下常见的类型：

1．吸附色谱法

2．化学键合相色谱法(分配色谱法)

3．离子交换色谱、离子色谱、反相离子对色谱

4．排阻色谱(凝胶色谱法);分类

1．吸附色谱法(adsorptionchromatography)

以微粒硅胶为吸附剂(固定相)，利用吸附剂对极性不同的物质有不同的吸附力进行分离。;分类

2．化学键合相色谱法(chemicalbondedstationaryphasechromatography,bondedphasechromatography)：

以化学键合相为固定相进行分离。

将有机官能团通过化学反应，共价键合到硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相称为化学键合固定相(chemicalbondedsta