化学键合相色法离子交换.pptx

第九章－4

化学键合相色谱

离子交换键合相色谱

ionexchangechromatography，IEC

1、早期离子交换色谱

固定相：高分子聚合物（如聚苯乙烯树脂）为基质的离子交换树脂

缺点：由于溶胀性，不耐高压，以及表面的微孔型结构影响传质速率。

2、离子交换键合相色谱

定义：在化学键合的有机硅烷分子中带上固定的离子交换基团，便成了离子交换键合相。

阳离子交换剂：

磺酸基(-SO3H)、羧酸基(-COOH)

阴离子交换剂：

季氨基(-R4N+)、氨基(-NH2)

离子交换键合相色谱

基质：薄壳型或全多孔微粒硅胶

优点：具有较高的耐压性；

化学及热稳定性；

由于有较好的机械强度，耐压；

可以高压匀浆装柱。

缺点：pH适用范围只能在pH2-8。

pH＞9时，硅胶便容易溶解。

未键合的残留硅羟基易生成硅酸盐。

阴离子交换剂

５μm

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3、离子交换容量

交换容量是指单位质量的离子交换剂所能与其它离子发生交换的量。

交换容量越大，负载能力越大，ｋ＇值也越大。

离子交换键合相的交换容量与固定相的表面积直接有关。

全多孔微粒型固定相：

测定方法：酸碱滴定法

优点：传质快，渗透性好

缺点：表面积较小，样品容量小（0.1mg/g）

优点：表面积大，样品容量大（mg/g）

薄壳型(表面多孔层)：

4、分离机理

1）阳离子交换

BH：样品离子

M：流动相离子

R：固定相带负电荷的交换基团

4、分离机理

1）阳离子交换

BH：样品离子

M：流动相离子

R：固定相带负电荷的交换基团

4、分离机理

2）阴离子交换

A：样品离子

N：流动相离子

R：固定相带正电荷的交换基团

5、流动相

成分：多为控制一定的pH的缓冲液、有机成分作为改性剂。

溶质的保留机理：兼有离子交换和吸附双重机理。

溶质的保留值影响因素：流动相的pH值、离子强度以及有机改性剂。

1）pH值对保留时间的影响

流动相的pH选择应适中，最好选择在被分离的酸或碱的pka或pkb附近，使它们解离适中，达到最佳分离。

弱酸及弱碱的保留值与洗脱液的pH值有关

先解离并参加离子交换而被分离

不解离，不参加离子交换，而以分子形式几乎无保留地通过柱子

Tips

保留规律

阴离子交换剂分离有机酸

在用强阴离子交换键合相分离酸性药物时，pH↑→药物解离度↑→ｋ’↑，保留时间↑。

pH越小，酸的解离被抑制，保留越小

pH越大，酸的解离程度增大，保留增强

阴离子交换剂分离有机酸

在用强阴离子交换键合相分离酸性药物时，pka值越小，保留时间↑。

例：离子交换色谱法分析核苷酸

AMP:一磷酸腺苷

ADP:二磷酸腺苷

ATP:三磷酸腺苷二钠

流动相：含5%甲酸的10%甲醇水溶液（A相）－含1%甲酸的10%甲醇水溶液（B相）0min100％B→3min100％A

色谱柱：AlltechAllsepAnioncolumn（100mm×4.6mm,7m）

保留规律

阳离子交换剂分离有机碱

在用强阳离子交换键合相分离碱性药物时，pH↑→游离碱↑→ｋ’↓，保留时间↓。

pH高，碱以分子形式存在，保留值很小

pH低，碱以质子化形式存在，保留值较大

三聚氰胺的分析

化学名：2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪

分子式：C3H6N6

呈弱碱性（pKa=8）

流动相：

乙腈:水(10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠，用NaOH调pH至3.0)=10:90(v/v)

离子对色谱法

例：离子交换色谱法分析三聚氰胺

流动相：含Ph3.0的磷酸二氢钾-乙腈溶液（70：30）

色谱柱：agilentzorbax300-SCX（250mm×4.6mm,5m）