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动物细胞培养技术体系

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目录

CONTENTS

01

细胞培养基础概述

02

核心培养流程规范

03

培养环境控制系统

04

细胞系选择与管理

05

工业化应用场景

06

前沿技术挑战

01

细胞培养基础概述

基本定义与原理

01

细胞培养定义

细胞培养是指在无菌、适当温度和一定营养条件下，模拟机体内环境，使细胞在体外生长和繁殖的技术。

02

细胞培养原理

细胞在体外培养时，需要依赖营养物质、生长因子、激素等条件进行生长和分裂，通过细胞间的相互作用来维持其生命活动。

生物医学应用领域

药物研发与筛选

细胞培养技术可用于药物研发过程中的药效评估、毒性测试等环节，提高药物研发效率。

03

细胞培养技术可以制备特定类型的细胞，用于细胞治疗、组织工程和再生医学等领域。

02

细胞治疗与再生医学

疾病模型建立

利用细胞培养技术可以模拟人体疾病过程，为研究疾病发病机制、筛选药物等提供实验模型。

01

技术发展里程碑

1957年

1962年

1975年

2007年

首次成功培养动物细胞，开启了细胞培养技术的时代。

建立了细胞系，使得细胞培养技术得以广泛应用。

首次利用细胞杂交技术制备出杂交瘤细胞，推动了单克隆抗体技术的发展。

诱导多能干细胞技术的建立，使得细胞治疗和组织工程等领域取得了重大突破。

02

核心培养流程规范

严格按照配方进行，确保各成分比例准确。

配制过程

根据细胞特性调整pH值，确保细胞生长环境适宜。

pH调整

01

02

03

04

基础培养基、血清、生长因子、抗生素等。

成分

配制后的培养基需储存于特定条件下，如温度、光照等。

储存条件

培养基配制标准

无菌操作关键步骤

实验前准备

实验器材、试剂和培养基的灭菌处理。

01

操作过程

在无菌环境下进行细胞接种、传代和收获。

02

防止污染

严格遵守无菌操作规程，避免微生物污染。

03

无菌检测

定期对培养物进行无菌检测，确保培养体系无菌。

04

原代与传代培养差异

原代培养

遗传稳定性

传代培养

应用领域

直接从生物体内获取的细胞进行培养，细胞生物学特性与体内相似。

原代培养细胞经过传代后，细胞特性可能发生变化，如增殖能力、形态等。

原代培养细胞遗传背景复杂，传代培养细胞遗传背景相对单一。

原代培养细胞适用于药物筛选、毒性实验等，传代培养细胞适用于基础研究、细胞治疗等。

03

培养环境控制系统

CO₂培养箱参数

温度控制

CO2浓度

湿度控制

气流控制

维持细胞最适生长温度，一般哺乳动物细胞维持在37℃左右。

维持培养箱内CO2浓度稳定，一般哺乳动物细胞所需的CO2浓度为5%左右。

保持培养箱内适宜的湿度，有助于细胞生长和分裂。

确保培养箱内空气流通，避免细胞污染。

操作前消毒

采用紫外线或化学消毒剂对操作区进行消毒，减少微生物污染。

高效过滤

通过高效过滤器过滤空气中的细菌和病毒，保证操作环境的洁净度。

气流保护

操作时形成气流保护区，防止外部污染进入操作区。

安全排放

将操作产生的气溶胶和有害气体安全排放，保护实验人员和环境安全。

生物安全柜功能

动态监测设备

实时监测

实时监测培养箱内的温度、湿度、CO2浓度等关键参数，确保细胞生长环境稳定。

01

报警系统

当监测参数超出设定范围时，及时发出报警信号，提醒实验人员进行处理。

02

数据记录

自动记录监测数据，便于实验结果的追溯和分析。

03

远程监控

通过网络技术实现对培养环境的远程监控，方便实验人员随时掌握细胞生长情况。

04

04

细胞系选择与管理

永生化细胞特性

无限增殖能力

生物学特性

遗传稳定性

安全性

永生化细胞具有不受细胞衰老限制的增殖能力，可长期在体外培养。

永生化细胞在传代过程中，遗传物质保持稳定，有利于实验结果的重复性。

永生化细胞保留了原代细胞的某些生物学特性，如分化、分泌、代谢等。

永生化细胞需经过特殊处理或筛选，以确保其不含有致瘤或致病基因。

细胞冻存与复苏

冻存方法

复苏操作

冻存液选择

细胞密度

采用慢速降温或快速降温的方式，将细胞悬浮在特定冻存液中，置于液氮中长期保存。

从液氮中取出细胞后，迅速在37℃水浴中融化，并进行细胞活力检测和培养。

常用的冻存液包括血清、二甲基亚砜（DMSO）等，它们能有效保护细胞免受冰晶损伤。

冻存时细胞密度要适中，过密或过疏都会影响细胞复苏后的生长状态。

采用培养法、染色法等方法，检测细胞培养液中是否有细菌污染。

采用真菌培养基、显微镜观察等方法，检测细胞培养液中是否有真菌污染。

采用细胞病变观察、免疫荧光检测、PCR等方法，检测细胞是否被病毒污染。

采用培养法、PCR等方法，检测细胞是否被支原体污染，因为支原体污染对细胞培养的影响较为隐蔽。

污染检测方案

细菌污染检测

真菌污染检测

病毒污染检测

支原体污染检测

05

工业化应用场景

生物