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基因编辑基因编辑(geneediting)又称基因组编辑(genomeediting)或基因组工程(genomeengineering)，是一种新兴的比较精确的能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的一种基因工程技术基因编辑技术：对生物体基因组中的靶DNA序列进行位点特异性插入、删除、替换等修改的技术，包括锌指核酸酶技术(ZFN)、转录激活类效应因子核酸酶技术以及CRISPR—Cas9技术CRISPR—Cas9系统由Cas9蛋白、cRNA、tRNA组成基本原理：包括gRNA引导的Cas9靶向DNA切割和DNA修复两个基本过程首先，Cas9蛋白特异性切割目标DNA序列，产生DNA双链断裂Cas9蛋白含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链

基因编辑然后，细胞内的DNA修复系统修复双链断裂，在修复的过程中实现DNA序列的改变CRISPR—Cas9系统基因编辑原理图CRISPR—Cas9系统分为两类

基因编辑第一类是利用多Cas蛋白复合体切割双链DNA第二类是利用单一Cas蛋白切割双链DNACRISPR—Cas9系统研究的最为透彻已被广泛应用于多种生物的基因定点编辑、基因组筛选、基因转录调控、基因组成像、基因诊疗等方面基本流程

基因编辑gRNA设计：利用在线CRISPR设计工具设计靶向目的基因组的20bp长度引导序列gRNA和Cas9共表达质粒的构建合成在线CRISPR设计给出的相应寡核苷酸序列及引物gRNA有效性鉴定：将gRNA和Cas9共表达质粒转染目的细胞，以基因组DNA或RNA为模板进行PCR扩增、测序、验证gRNA的有效性，单克隆细胞系鉴定gRNA敲除效果，核酸酶实验检测插入缺失和定向突变。如下基因编辑

基因编辑1CRISPR-Cas9系统的分子机制2目前被广泛应用于基因编辑的是CRISPR-Cas9系统：相比于其他系统，Cas9系统组成较为简单，具体机制更加清晰，仅Cas9一种蛋白质就能完成多项功能。CRISPR-Cas9系统以序列特定的方式识别与剪切外源DNA或者RNA，其引起的细菌自身防御机制通过3个阶段来实现：捕获间隔序列、合成crRNA和靶向干扰噬菌体DNA3捕获间隔序列4在这一阶段中：源于噬菌体DNA或RNA的原型间隔序列(protospacer)将会被识别并且剪切，最终被整合到细菌基因组的CRISPR序列之中。这个过程分为剪切原型间隔序列和插入整合原型间隔序列两步，主要是由适配功能相关的Casl、Cas2蛋白完成，Cas4则作为辅助蛋白质与Casl、Cas2形成复合物参与适配

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基因编辑合成crRNACrRNA的合成是由参与表达的Cas蛋白完成在CRISPR-Cas9系统中则主要是由RNaseIⅢ和Cas9蛋白完成。当原型间隔序列导入CRISPR序列中形成间隔子后，细菌会将其转录为前体crRNA转录物。CRISPR-Cas9系统中的tracrRNA有部分碱基序列与pre-crRNA上的重复序列存在严格的碱基互补关系，两者形成双链RNA。RNaseIII会剪切dsRNA形成中间crRNA,完成crRNA的初加了，这个过程发生在Cas9蛋白的表层上。二次加工是Cas9对int-crRNA5末端的重复序列和间隔区序列进行修剪，使其变为成熟crRNA(maturecrRNA,mat-crRNA).剪切形成的这种mat-crRNA被称为gRNA(guideRNA)，Cas9核酸酶和gRNA形成Cas9核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)

基因编辑靶向干扰噬菌体DNARNP可以通过2种方式识别外源DNA的原型间隔序列：一是RNP中的gRNA通过与目标DNA原型间隔序列互补的片段决定剪切的特异性；二是Cas9蛋白也能识别外源切非互补的DNA链，造成平末端剪切。通过剪切可以引起目的基因DNA的双链断裂，从而干扰目的基因的表达当外源DNA再次进入细胞时

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基因编辑CRISPR-Cas9技术在作物育种中的应用在水稻中的应用CRISPR-Cas9技术作为一种新型高效的基因组定点编辑技术：近年来在水稻作物育种改良方面备受研究者的青睐。雄性不育系是传统杂交稻育种的核心，传统杂交育种具有周期长、劳动强度大等缺点，而利用CRISPR-Cas9技术敲除水稻生育相关基因，经过1–2代选育就可快速获得非转基因雄性不育系，加速水稻的育种

基因编辑4在小麦中的应用5小麦属于异源六倍体是世界上第二大粮食作物，为人类提供约20%的能量，由于其基因组较为庞大，育种也受到一定程度的影响。CRISPR-Cas9技术的高效性和特异性很好地解决了这一难题。研究人员对小麦通过CRISPR-Cas9技术定点突变，获得稳