控制菌检查用培养基适用性检查操作规程.docVIP

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部门及职责

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起草

部

相关部门审核

QA审核

质量管理部

部门审核

部

同意

质量责任人

文件复审日期

1目

建立一个控制菌检验用培养基检验操作程序。

2适用范围

控制菌检验中用培养基。检验项目包含培养基促生长、指示和抑制特征能力。

3发放范围

质量部

4职责

责任人

职责

质量部

负责起草实施该文件。

5内容

5.1菌种和菌液制备

5.1.1控制菌检验用培养适用性检验试验用菌株。

大肠埃希菌（Escherichiacoli)[CMCC(B044102]

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B026003

乙型副伤寒沙门菌

铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[CMCC(B)10104

生孢梭菌(Clostridiumsporgenes)[CMCC(B)64941]

白色念珠菌Candidaalbicans)[CMCC(B)98001]

5.1.2将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上,30-35℃培养18-二十四小时,将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中,20-25℃培养2-3天,将生孢梭菌接捉于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30-35℃培养24-48小时或接种于硫乙醇酸盐液体培养基中30-35℃培养18-二十四小时。

5.2多种培养基需要测试能力及判定指标

5.2.1液体培养基促生长能力检验,取小于100cfu试验菌分别接种于被检验培养基和对照培养基中,在对应控制菌检验要求培养温度及小于要求最短培养时间下培养。增菌培养基多澄清液体培养基,与对照培养基比较,被检验培养基中试验菌应生长良好,表现为液体培养基浑浊。

固体培养基促生长能力检验:取试验菌液（含菌数小于100cfu）分别涂布于被检验培养基和对照培养基上,在对应控制菌检验要求培养温度及小于要求最短时间下培养,与对照培养基比较,被检验培养基与对照培养基上生长菌落大小、形态特征应一致。若被检验培养基上菌落平均数与对照培养基上菌落数比值应在50-200%,且菌落形态、大小与对照培养基上菌落一致,则判定该培养基适用性检验促生长能力符合要求。

5.2.2培养基抑制能力检验:取不少于100cfu试验菌分别接种于被检验培养基和对照培养基,在对应控制菌检验要求培养温度及小于要求最长培养基时间下培养,试验菌应不得生长。

5.2.3液体培养基指示能力检验:取小于100cfu试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中,在对应控制菌检验要求培养温度及小于要求最短培养时间下培养。与对照培养基比较,被检验培养基中试验菌应生长情况/指示剂反应等应与对照培养基一致。

固体培养基指示能力检验:取试验菌液（含菌数小于100cfu）分别涂布于被检验培养基和对照培养基上,在对应控制菌检验要求培养温度及小于要求时间下培养,与对照培养基比较,被检验培养基与对照培养基上生长菌落大小、形态特征、菌落颜色及指示剂反应等应一致。

5.3控制菌检验用培养基能力测试列表

控制菌检验包含14种培养基特点各异味,表中概述培养基检验具体项目,具体操作在其后说明。

表1控制菌检验用培养基促生长能力、抑制能力和指示特征

控制菌检验

培养基

特征

试验菌株

耐明盐革兰阴性菌

肠道菌增菌液体培养基

促生长能力

大肠埃希菌、铜绿假单胞菌

抑制能力

金黄色葡萄球菌

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基

促生长能力+指示特征

大肠埃希菌、铜绿假单胞菌

大肠埃希菌

麦凯康液体培养基

促生长能力

大肠埃希菌

抑制能力

金黄色葡萄球菌

麦凯康琼脂培养基

促生长能力+指示特征

大肠埃希菌

RV沙门菌增菌液体培养基

促生长能力

乙型副伤寒沙门菌

抑制能力

金黄色葡萄球菌

木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基

促生长能力+指示特征

乙型副伤寒沙门菌

三糖铁琼脂培养基

指示能力

乙型副伤寒沙门菌

溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基

促生长能力

铜绿假单胞菌

抑制能力

大肠埃希菌

甘露醇氯化钠琼脂培养基

促生长能力+指示特征

金黄色葡萄球菌

抑制能力

大肠埃希菌

梭菌增菌培养基

促生长能力

生孢梭菌

哥伦比亚琼脂培养基

促生长能力

生孢梭菌

沙氏葡萄糖液体培养基

促生长能力

白色念珠菌

沙氏葡萄糖琼脂培养基

促生长能力+指示特征

白色念珠菌

念珠菌显色培养基

促生长能力+指示能力

白色念珠菌

抑制能力

大肠埃希菌

5.4控制菌培养基适用性检验具体操作过程:

5.4.6木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基:新鲜配制对照木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基,121℃