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中国科技论文在线
北沙柳SSR－PCR反应体系优化及引物
筛选#
张玮，张国盛，王林和，李小龙，黄海广，曲娜**
5（内蒙古农业大学林学院，呼和浩特010019）
摘要：以TIANGEN试剂盒法提取北沙柳嫩叶的DNA为模板，利用柳属和杨属的SSR引物，
建立了北沙柳SSR-PCR反应体系，对反应体系中影响聚合酶链式反应（PCR）的因素进行
了优化。结果表明，在25μl的PCR反应体系中，DNA模板用量为40ng，TaqDNA聚合酶
0.05U/μl，10×PCRbuffer（含Mg2+）2.5mM，dNTP0.25mM，SSR引物0.5μM，加ddH2O
10补足至25μl时结果最好。利用该体系初步筛选出30对适合北沙柳SSR扩增的引物，并采
用优化筛选出的12对引物对9个产地的270个北沙柳无性系进行PCR扩增，多态位点百分
率达到90.4%，表明柳属和杨属的SSR引物可以在北沙柳上应用。
关键词：北沙柳；SSR－PCR；反应体系优化；引物筛选
15OptimizationoftheSSR-PCRSystemandSelectionof
PrimersinSalixpsammophila
ZhangWei,ZangGuosheng,WangLnhe,LiXiaolong,HuangHaiguang,QuNa
(ForestyCollegeInnerMongoliaAgricultuealUniversity,Hohhot010019)
Abstract:UsingTIANGENextractionSalixpsammophilaleavesDNAasatemplate,useofSalix
20andPopulusSSRprimer,establishedtheSalixpsammophilaSSR-PCRreactionsystem,the
reactionsystemofPCRfactorswereoptimized.TheresultindicatedthattheoptimizedSSR
reactionsystemfortheplantwas40ngtemplateDNA,0.05U/μlTaqDNApolymerase,2.5mmol
2+
10×PCRbuffer(Mg),0.25mmoldNTP,and0.5μmolprimer,In25μlreactionvolumes.SSR－
PCRreactionsystemwasdeterminedonatotalvolume25μlsystem,12SalixpsammophilaSSR
25primerswereselected.Clonesfrom9originalareaswereamplifiedby12primers.witha
percentageof90.4intotal,SalixandPopulusSSRprimerscanbeusedintheSalixpsammophila.
Keywords:Salixpsammop
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