基于秀丽隐杆线虫生殖毒性检测技术规范.docx

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基于秀丽隐杆线虫生殖毒性检测技术规范

1范围

本标准规定了单一或混合性化学品对秀丽隐杆线虫生殖毒性实验的术语和定义、秀丽隐杆线虫品

系和细菌、操作方法、结果观察和结果判定。

本标准适用于评估不具有腐蚀性的单一或混合性化学品对秀丽隐杆线虫生殖毒性的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中标注日期的引用文件，仅所标注日期的版本适用于本文件。未标注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改版本)适用于本文件。

2.1GB15193.15-2015食品安全国家标准生殖毒性试验

2.2GB15193.29-2020食品安全国家标准扩展一代生殖毒性试验

2.3GB/T21766-2008化学品生殖/发育毒性筛选试验方法

2.4GBZ/T240.22化学品毒理学评价程序和试验方法：两代繁殖毒性试验

2.5GB/T35517-2017化学品鱼类生殖毒性短期试验方法

2.6GB/T35522-2017化学品土壤弹尾目昆虫生殖试验

2.7ASTME2172-2001(2014)利用秀丽隐杆线虫进行实验室土壤毒性试验的标准指南

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

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3.1后代数(broodsize)

将染毒后并发育到年轻成虫期(Youngadult)的秀丽线虫随机挑出30条分别放入新配置的加有2.5μLOP50(大肠杆菌)的直径3cmNGM培养基上，将处于成虫期的的线虫每24h转一次板，观察进入产卵期后每天的产卵数量动态变化直至线虫不再产卵，36h后分别计数每块板中线虫的数量，合并求和后为后代数的值。

3.2世代时间(generationtime)

于显微镜下观察，将P0代线虫产第一只卵的时间记为Ti,产的第一只卵成熟后进入产卵期后，所产

的第一只卵记为T2,T?-Ti的时间记为世代时间。

3.3瞬时产卵率(ovulationrate)

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染毒后发育到年轻成虫期(Youngadult)雌雄同体线虫继续培养24h后每个剂量组挑30条到新的培养

皿中，4h后将线虫挑出，计数虫卵数目，计算每小时平均产卵率，即为瞬时产卵率。

3.4生殖系统畸形率(abnormalitiesofreproductivesystem)

将染毒后发育到年轻成虫期(Youngadult)雌雄同体线虫置于滴有M9缓冲溶液的载玻片上，采用1mM盐酸左旋咪唑麻醉，至于显微镜下观察并拍摄照片。生殖系统的畸形包括排卵孔凸出、无排卵孔、

子宫内小受精卵、性腺发育异常、无卵和虫袋等类型。每组观察100条线虫，计算发生不同畸形表型的线虫百分比。

生殖系统畸形率=生殖系统各畸形表型数/100

3.5-2卵母细胞

卵母细胞是指线虫单侧性腺臂远端loop区到性腺臂近端纳精囊之间的细胞，纳精囊旁第二个终变期

卵母细胞即为-2卵母细胞。

4秀丽隐杆线虫品系和细菌

4.1N2线虫(雌雄同体线虫),DR466:him-5(e1490)(雄性个体代表),CB4108:fog-2(q71)(雌性个体代表)品系，源自秀丽隐杆线虫遗传中心(CaenorhabditisGeneticCenter,CGC)(https:/)

4.2大肠杆菌菌株EscherichiacolistrainOP50,由线虫实验室保存。

5秀丽隐杆线虫发育周期与生殖系统示意图

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成虫(1110-1150μ

成虫(1110-1150μm)

(具备产卵能力)

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年轻成业(800-9um)4/成虫税变则

10h

子宫发育(150min)

第一次分裂(40min)

体内产郭(大约30个经

Comma阻

L4期(620-0m

1.5信体

子宫发育19h

耐受态幼虫(40Oum

2.5借体

躲变期

列挤

8h

12h

剪化

耐受态幼虫前期(L2物无☆物时将止生长A1/L2蜕变期

13A4统变购8h

L2期(360-380um)饥流

L3期0-50m

L1期(250u

最长4个月

图1雌雄同体线虫发育周期示意图

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Fig.1Schematicdiagramoflifecycleofhermaphroditenematodes

#/hermaphrodite/introduction/Introframeset.html

注：秀丽隐杆线虫能在16℃~25℃之间生长，适宜温度为20℃,秀丽隐杆线虫在25℃时的