DB32／T 3762.21-2023 新型冠状病毒检测技术规范 第21部分：污水样本病毒富集浓缩和检测.pdf

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DB32/T3762.21—2023

新型冠状病毒检测技术规范第21部分：

污水样本病毒富集浓缩和检测

TechnicalspecificationsforSARS⁃CoV⁃2detection—Part21：

Concentrationanddetectionofvirusinsewagesamples

2023-07-25发布2023-08-25实施

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DB32/T3762.21—2023

新型冠状病毒检测技术规范第21部分：

污水样本病毒富集浓缩和检测

1范围

本文件规定了污水样本中新型冠状病毒富集浓缩和检测方法。

本文件适用于生活、医疗、商业和工业等污水样本中的新型冠状病毒的浓缩富集和检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

WS/T799—2022污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准

3术语和定义

以下术语和定义适用于本文件。

3.1

裂解法pyrolysismethod

利用裂解盐使污水中病毒核酸与蛋白分离，高盐条件下的污水通过滤膜，其核酸样本被膜吸附，完成

富集过程，利用低盐条件将吸附的核酸样本从膜上洗脱，再进行后续检测分析。

3.2

回收率recoveryefficiency

浓缩富集后回收样本的总拷贝数与原污水样品中接种的病毒总拷贝数之比。

4检出限与回收率

富集浓缩采用裂解法时，方法的检出限为1copy/mL，N靶标的回收率为16%~65%，ORF1ab靶标

的回收率为10%~48%。

5环境与设施

富集浓缩和检测等操作应在生物安全二级实验室（BSL⁃2）进行，同时采用不低于生物安全三级实验

室的个人防护。实验过程中产生的所有废弃物（包括剩余水样）均应经有效灭菌后再按医疗废弃物进行

分类处理。新冠病毒核酸检测实验室应满足GB19489。

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6设备与耗材

6.1设备

生物安全柜、移液器（10μL、50μL、200μL、1mL）、电动移液器、冷冻离心机（4℃、2mL转子）、pH

计（精度≥0.01）、水浴锅、多孔真空抽滤装置、滚轴摇匀仪、电子天平（分辨力不低于0.001g）、实时荧光

定量PCR仪或数字PCR仪。

6.2耗材

N95及以上防护口罩、医用无纺布帽、护目镜、连体防护服、一次性PE手套、一次性手术衣、乳胶手

套、防水靴套。

7试剂与材料

7.1试剂

氯化钠（NaCl，分子生物学级）、无核酸酶水（分子生物学级）、乙醇（70%）、TE缓冲液（1mol/LTris，

100mmol/LEDTA）（配制方法：称取12.11g三羟甲基氨基甲烷（Tris，纯度≥99%），3.36g乙二胺四乙

酸二钠（纯度≥99%），置于烧杯中，加入70mL水，搅拌溶解后转移至试剂瓶中，用盐酸将pH调至7.2，

定容至100mL）。