TCIQA 112-2025 动物源性食品中牛、羊和猪源性成分定性检测方法 CRISPR法.docxVIP

ICS67.050

CCSX16

团 体 标 准

T/CIQA112-2025

动物源性食品中牛、羊和猪源性成分定性检测方法CRISPR法

Determinationofingredientsofcattle,sheepandpiginanimalfood–CRISPRmethod

2025-04-25发布 2025-04-25实施

中国出入境检验检疫协会发布

目 次

前言… I

1范围… 1

2规范性引用文件… 1

3缩略语 1

4原理 1

5试剂和材料 1

6仪器和耗材 2

7试样制备 2

8试验步骤 3

9结果计算 4

10质量控制 4

11检测结果判定和表述 4

12结果报告 4

13检测过程中防止交叉污染的措施 4

附录A（资料性）牛、羊和猪源性成分RPA扩增参考序列 5

前 言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会（CIQA/TC10）提出并归口。

本文件起草单位：南京师范大学、杭州努咖智能科技有限公司、努咖智能科技(扬州)有限公司、中国农业科学院深圳农业基因组研究所(岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心)、上海市生物医药技术研究院

本文件主要起草人：吴丽娜、唐进、徐晴、李亚楠、孟伶通、徐诗琦、王鑫杰、黄行许、李广磊、周建奎、梁启

本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以营利为目的，印制、出版、翻译、转发或复制全文或部分文字。

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T/CIQA112-2025

T/CIQA112-2025

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动物源性食品中牛、羊和猪源性成分定性检测方法CRISPR法

范围

本文件描述了动物源性食品中牛、羊和猪源性成分的CRISPR检测方法。本文件适用于动物源性食品中牛、羊和猪源性成分的定性检测。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403-2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测

GB/T24777-2009化学品理化及其危险性检测实验室安全要求

SN/T5624-2023检测实验室质量安全风险管理通则

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

crRNA：规律间隔成簇短回文重复序列核糖核苷酸（CRISPRRNA）

CRISPR：规律间隔成簇短回文重复序列（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats）RPA：重组酶聚合酶扩增（recombinasepolymeraseamplification）

tracrRNA：反式激活CRISPRRNA（trans-activationCRISPRRNA）

原理

通过CRISPR方法对动物产品中牛、羊和猪源性成分开展定性检测。首先采用RPA进行牛、羊和猪源性基因特异性扩增，再用CRISPR反应特异性切割扩增产物，观察荧光值增量并给出结果判定。

试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682二级水的要求。所有试剂均用无DNA/RNA酶污染的容器分装。

裂解液：20g/L十六烷基三甲基溴化铵,1.4mol/L氯化钠,0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐,0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠二水合物,pH调至8.0。

三氯甲烷。

异戊醇。

异丙醇。

乙醇。

10XNEBuffer2.1:100mM氯化钠,50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐,10mM氯化镁,pH7.9。

RNA酶抑制剂。

RPA反应使用RPA试剂盒1，包括：a）无引物再水和缓冲液

b）醋酸镁溶液

Cas12a酶选用NewEnglandBiolab商业化产品EnGen?LbaCas12a。

检测用引物和探针

RPA扩增所用引物及CRISPR反应crRNA和探针序列详见表1。牛、羊和猪源性成分RPA扩增序列参见附录A。

表1 牛、羊和猪基因引物、crRNA与探针

名称

引物/探针序列（5’-