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海水污染对虾类生物体内毒性的分子机制研究

目录

文档概览．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1.1海洋环境现状概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1.2虾类在生态系统和经济中的地位．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.1.3海洋污染对虾类健康的潜在威胁．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.2国内外研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

1.2.1海洋污染物种类及其来源分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

1.2.2污染物对虾类影响的已有研究综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.2.3分子水平毒性机制研究的最新动态．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

1.3研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

1.3.1本研究的核心目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

1.3.2主要研究内容和拟解决的关键问题．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

1.4技术路线与研究方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

1.4.1实验设计与样本采集方案．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

1.4.2分子生物学实验技术平台．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.1.1实验虾类品种与养殖条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

2.1.2污染物来源与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

2.1.3主要试剂与仪器设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

2.2实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

2.2.1虾类暴露实验设计与分组．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

2.2.2样本采集与保存．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

2.2.3生物指标检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

2.2.4组织样品制备与总RNA提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

2.2.5基因表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

2.2.6蛋白质表达与修饰分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

2.2.7信号通路与分子互作分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

2.2.8数据统计与分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．47

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．48

3.1海水污染物暴露对虾类生物学指标的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．49

3.1.1污染物暴露对虾类生长指标的变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

3.1.2污染物暴露对虾类存活率及行为的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

3.1.3污染物暴露引起的组织病理学观察．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

3.2污染物暴露诱导的虾类基因表达变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54

3.2.1污染物胁迫下差异表达基因的筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55

3.2.2与毒性响应相关的关键基因表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57

3.2.3基于转录组学的功能富集与通路分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58

3.3污染物暴露对虾类蛋白质组的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．59

3.3.1污染物暴露引起的关键蛋白质表达水平变化