仪器分析项目五高效液相色谱分析94课件.pptxVIP

仪器分析项目五高效液相色谱分析

认识高效液相色谱法1认识高效液相色谱仪2掌握高效液相色谱仪的应用3

概念与特点分离类型认识高效液相色谱法1

1.2.1液-固吸附色谱法液-固吸附色谱法是以固体吸附剂作固定相，被分离物质在固定相吸附力大小的不同而实现分离的方法。固定相极性：硅胶、氧化铝等，其中全多孔型硅胶微粒固定相使用最广泛。非极性：活性炭等。流动相极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用极性较低的流动相。特别适宜于分离异构体。具体为偶氮染料、维生素、极性小的植物色素等。分离原理

1.2.2液-液分配色谱法分离原理液-液分配色谱法是根据物质在两种不互溶（或部分互溶）的液体中溶解度的不同而实现分离的方法。将特定的液态（固定液）涂渍在惰性载体（担体）表面制备固定相，与流动相组成液液两相。组分分离时依据不同的组分在互不相溶的两相中分配系数不同，因而溶质在两相间进行分配。固定液易被流动相渐渐溶解而流失，流动相流速不能高，不能采用梯度洗脱，柱的重复性、稳定性不好，使用受限。

1.2.3键合相色谱法定义化学键合相色谱法（BPC）是采用将固定液利用化学反应键合到载体表面上，使其形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相的液相色谱法。据统计，在高效液相色谱法中，约有80%的分离问题可以用键合相色谱法解决。十八烷基硅烷(ODS)键合相

1.2.3键合相色谱法化学键合相类型载体：广泛使用全孔型或薄壳型微粒硅胶。键合反应：硅烷化反应、硅酸酯化反应类型：非极性键合相（键合ODS或C18等非极性基团）极性键合相（键合-NH2、-CN、醇基等极性基团）离子型键合相（键合季铵盐、磺酸基等可交换阴或阳离子基团)据统计，在高效液相色谱分析任务中，约有80%由C18反相键合相解决。

1.2.3键合相色谱法正相键合相色谱法特征——固定相极性＞流动相极性固定相——-NH2、-CN等极性键合相流动相——非极性或弱极性溶剂（如正己烷）+适量极性溶剂（如乙腈、三氯甲烷、醇等混合溶剂分离机制——类似液-液分配色谱的分离原理应用范围——分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物

1.2.3键合相色谱法反相键合相色谱法特征——固定相极性＜流动相极性固定相——ODS（C18）或辛烷基硅烷（C8）等非极性或弱极性键合相流动相——水+有机调节剂（如水-甲醇、水-乙腈、水-甲醇-无机盐缓冲液等）分离机制——“疏溶剂作用”理论应用范围——适用于分离非极性至中等极性的分子型化合物

1.2.3键合相色谱法1-对羟基苯甲酸甲酯2-对羟基苯甲酸乙酯3-对羟基苯甲酸丙酯4-对羟基苯甲酸丁酯当溶质分子的极性一定时，若增大流动相的极性（水相比例增大），则降低流动相对溶质分子的洗脱能力，使溶质的分配比增大，保留时间增大；反之亦然。

固定相：C1固定相：C8固定相：C181-尿嘧啶2-苯酚3-乙酰苯4-硝基苯5-苯甲酸甲酯6-甲苯反相键合色谱中，键合相碳链越长，分离效果越好。反相色谱分离实例

1.2.3键合相色谱法流动相要求：（1）纯度要高：色谱纯→过滤（0.45μm有机膜）→脱气；（2）对色谱柱、固定相和分离组分要有惰性；（3）对样品要有适宜的溶解度；（4）与检测器要相匹配：紫外检测器：要求流动相在紫外区吸收很弱；示差折光检测器：要求流动相与样品组分的折光率相差较大。常用溶剂极性顺序：水乙腈甲醇乙醇丙醇四氢呋喃二氯甲烷实际上采用适当比例的二元混合溶剂可适应不同类型的样品分析，有时采用三元甚至四元混合溶剂以获得最佳分离。实际使用中，采用甲醇-水体系已能满足多数样品的分离要求。

1.2.4离子色谱法离子色谱法是利用不同待测离子对固定相上的交换基团亲和力差别而实现分离。定义

1.2.4离子色谱法分离原理抑制型（双柱型）交换反应：R+-OH-+NaX→R+-X-+NaOH洗脱反应：R+-X-+NaOH→R+-OH-+NaX与组分反应：R-H++NaX→R-Na++HX与洗脱剂反应：R-H++NaOH→R-Na++H2O加了抑制柱后，进入检测器的本底是电导率很低的水，因此很容易检测出具有较大电导率的HX。分离柱抑制柱

1.2.4离子色谱法分离原理非抑制型（单柱型）使用更低交换容量的固定相，常使用浓度很低、电导率很低的流动相，如0.1-1.0mmol/L的苯甲酸、邻苯二甲酸或它们的盐溶液。由于本底电导较低,试样离子被洗脱后可直接被电导检测器所检测