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任务一胆汁酸检测

胆汁酸检测基础知识

背景介绍我国应用动物胆汁治疗疾病已有1000多年的历史。《本草纲目》收载了20余种动物的胆汁入药，国内外以胆汁为原料制造的生化药品，不包括牛黄配制的制剂，已达40多种。胆汁是生化制药的重要原料。胆汁酸是胆汁的主要成分，胆汁是脊椎动物特有的，是从肝分泌出来的分泌液。在夏季，猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅等动物胆汁，若不及时处理，室温放置会腐败发臭，也不便于贮存和运输，故常直接浓缩制成胆膏或干燥制成胆粉或进一步加工制成胆汁酸。

结构胆汁的许多生理生化功能主要是胆汁酸的作用，胆汁酸是胆汁的主要成分，也是特征性成分。胆汁苦味来源于所含胆汁酸，黏稠性来自黏蛋白，颜色来自胆色素。胆汁酸（bileacid）是指来自人体和动物胆汁的具有甾核（即类固醇核）结构的一类大分子酸。在较高级脊椎动物中，大部分天然胆汁酸是胆烷酸的衍生物，结构的基本骨架是甾核。在甾核C10和C13上连有甲基，C17位上的侧链是异戊酸。在甾核的不同位置上有羟基，C3位上的羟基在环系平面反一侧，为α-型。甾核上无双键。常见胆汁酸的羟基位置与构型如下：

胆汁酸呈白色粉末状，无臭，味苦，其碱金属盐均易溶于水和醇中。动物的胆汁中含有多种胆汁酸。胆汁酸是结合的各种胆酸类物质的总称。通常以肽键与甘氨酸和/或牛磺酸通过酰胺键相结合存在于胆汁中，并于钠、钾结合成胆汁酸盐而具有水溶性。各种动物胆汁中的胆汁酸含量不同，故在制备胆汁酸时，必须选择适宜的原料（见表1）。性质表1动物胆汁中主要胆汁酸的含量（％）动物胆酸去氧胆酸鹅去氧胆酸牛5.5～100.15羊1010.6狗201鸭140鸡14兔19

粗胆汁酸制备方法乙醇提取法酸沉淀法盐析法取胆膏加入其质量l/10～1/5的活性炭，加热，充分搅拌，蒸去水分至固形物能粉碎，用数倍量体积的95％乙醇提取3～5次，合并滤液，蒸馏回收乙醇，蒸干，即得淡黄色粗品胆汁酸盐。亦可将新鲜胆汁，加入10～20倍体积量的热乙醇，不断搅拌，放冷，过滤，滤液蒸馏至干即得。取胆汁加热浓缩至半量，趁热加入1～2倍体积95％乙醇，回流沸腾，冷却过滤，蒸馏回收乙醇，倾入稀盐酸中，pH不低于3。胆汁酸黏稠物放置过夜，倾出上清液，沉淀物用少量酸水洗1～2次，用95％乙醇加热溶解，调pH8～8.5，加活性炭脱色，过滤，蒸馏回收乙醇，干燥，即得胆汁酸粉末。本法适用于牛、羊、猪胆。鸡胆汁中胆汁酸溶解度较大，沉淀不完全，本法不大适用。取胆汁加乙醇去除蛋白质，蒸去乙醇，加NaCl使质量浓度达100～200g/L(10％～20％)，低温放置数日，大多数胆汁酸盐析出。自然过滤，沉淀以饱和盐溶液水洗2次，干燥，粉碎，以95％乙醇加热提取，活性炭脱色，蒸干即得。如不析出或盐析不完全，母液酸化pH2～3，加热煮沸，取沉淀溶于乙醇，调pH8～8.5，活性炭脱色，蒸去乙醇，即得胆汁酸盐。新鲜胆汁采集后，立即冰冻贮存或加适当防腐剂（如甲苯、麝香草酚、尼泊金、氯仿等）防腐。浓缩成胆膏或干燥成胆粉则更便于贮存和运输。家禽等小动物胆汁量少，最好采集后立即倾入沸腾的乙醇中，可防腐和除去蛋白质。粗胆汁酸的制备是各种胆汁酸分离、提取的基础，以下是粗胆汁酸常用的制备方法：