新型电化学DNA传感器进展.pptxVIP

电化学DNA传感器邵从英中国科学技术大学

化学传感器是一种小型化装置,它能够选择性地,连续地,可逆地感受液体和气体中化学物质的浓度,并将该信息实时地转换为电信号或光信号.一个传感器包括:1.化学敏感层,即识别系统(receptor)2.将化学信息转换为电信号或光信号的换能器(transducer)3.数据处理电子线路,即检测器(detector).换能器是电化学检测器的传感器都可称为电化学传感器.电压,电阻,电流或电化学发光信号等

利用单链DNA(ssDNA)或基因探针作为敏感元件固定在固体电极表面,加入识别杂交信息的电活性指示剂(称杂交指示剂),共同构成的检测特定基因的装置.其工作原理是利用固定固体电极表面的某一特定序列的ssDNA与溶液中的同源序列的特异识别作用(分子杂交)形成双链DNA(dsDNA),同时借助一能识别ssDNA与dsDNA的杂交指示剂的电流响应信号的改变来达到检测DNA的目的.电化学DNA传感器是近几年迅速发展起来的一种全新思想的生物传感器,其用途是检测基因及一些能与DNA发生特殊相互作用的物质(如蛋白质或其它小分子等).电化学DNA传感器

电化学DNA传感器基本示意图

一般常规检测DNA的方法是先利用凝胶电泳分离不同的DNA序列，再对各组分进行染色以后进行分析检测．仪器较昂贵，而电化学DNA传感器因其高的灵敏度、快的响应速度、操作简单、与微加工技术的兼容性好、成本低廉等优点愈来愈受到关注．介绍几种不同设计思想的电化学ＤＮＡ传感器：

最早的电化学ＤＮＡ传感器：利用ＤＮＡ在汞电极表面发生的氧化还原反应，很显然，被氧化或还原的ＤＮＡ的量能反映出被捕获的靶序列的量．这种方法很简单，但是背景电流干扰严重．ＤＮＡ直接氧化要求的电位就很大，会导致其它电活性物发生电极反应．有人检测前把ＤＮＡ分析物静电富集后再利用ＡＳＶ来研究ＤＮＡ的直接电化学，可以达到很高的灵敏度．12345检测限达４０femtomoles（～２×１０１０个分子）为了提高信噪比，也有人提出用物理分离法除去背景干扰源．如：两步法捕获ＤＮＡ靶序列．将ＤＮＡ探针固定于磁珠上，与靶序列杂交后，利用磁分离法将磁珠从分析液中分离出来，经酸处理后收集自由的鸟嘌呤和腺嘌呤核苷，再用ＡＳＶ分析之．一．直接电化学ＤＮＡ传感器

二．间接电化学ＤＮＡ传感器不是直接通过检测DNA的氧化还原电信号来进行靶序列的分析.而是引用了电活性媒介物－－ＤＮＡ杂交指示剂（如metalcomplexes,daunomycin,andmethyleneblue等）它们能选择性的结合在ds－ＤＮＡ链上，来实现ＤＮＡ靶序列的检测。检测限达attomoles即10-18M

DNA传感器制备的基础流程Au圆盘电极用矾土抛光,再用混合酸清洗,然后再进行电化学处理用被HS(CH2)6-标记的寡聚核苷酸探针修饰电极表面(既将电极置于250C探针溶液中3h)取出洗涤后,用长链烷基硫醇掩盖电极上未被探针分子结合的位点--------烷基硫醇(--HS)在Au上形成SAM移取2ul靶DNA溶液于已被修饰的电极表面并分布均匀,然后在250C保温适当时间杂交(形成ds-DNA)即完成将上述电极置于杂交指示剂溶液中10min,指示剂即沉积于电极上,取出洗去表面未被吸附的指示剂.即可用来做电化学响应测试

Ｆe（ＣＮ）６３－离子的循环伏安图，可知ＤＮＡ探针的确已被修饰到电极上.另外,在b未被ＤＮＡ探针修饰的电极上发生的是可逆电极反应,且峰电流在a被ＤＮＡ探针修饰的电极上发生的是不可逆电极反应；（由氧化还原峰电流之比及氧化还原峰电位差值可知）

靶序列与Ss-DNA探针完全配对或错配是的浓度-电流曲线杂交时完全配对A+B1个碱基错配A+C碱基完全错配A+E2个碱基错配A+DA:ss-DNAprobe[HS(CH2)6-5-d(TAAGGGAATGGTTAGGAAGGC)-3],B:fullymatchedoligonucleotide[5-d(GCCTTCCTAACCATTCCCTTA)-3],C:single-basemismatchedoligonucleotide[5-d(GCCTTCCTAACTATTCCCTTA)-3],D:double-base-mismatchedoligonucleotide[5-d(GCCTTCCTAACTCTTCCCTTA)-3],E:fullymismatchedoligonucleotide[5-d(CTTGATACGGATCAG